企业信息
第11年
- 入驻时间： 2009-07-24
- 联系人：张经理
- 电话：18910282540
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产品详情
简单介绍：
人DHVD3（1,25二羟基维生素D3） ELISA KiT(酶联**试剂盒) DHVD3（1,25二羟基维生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羟基维生素D3，DHVD3（1,25二羟基维生素D3）是维生素D在体内的高度活性形式，皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3，
详情介绍：
人DHVD3（1,25二羟基维生素D3） ELISA KiT(酶联**试剂盒) 工作原理】
DHVD3（1,25二羟基维生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羟基维生素D3，DHVD3（1,25二羟基维生素D3）是维生素D在体内的高度活性形式，皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3，在肝经25羟化酶系和肾脏1α羟化酶羟化作用下形成DHVD3（1,25二羟基维生素D3），是其在机体内发挥调节作用的基本形式。DHVD3（1,25二羟基维生素D3）是**症活动的天然调节剂，不仅能预防MS的发生，还可降低**的活动度，并且适当的血药浓度还可降低并发症（骨折及肌无力等）的发生。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联**吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体为多克隆DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体。检测相DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体也为多克隆DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)
材料 数量
标准品 96T(2vial)
预包被DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体的96孔板 96T（8×12）
生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体 96T (1:100)
浓缩ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA专用TBS洗涤液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的试剂和器材】
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendorf管。
【注意事项】
1． 从-20℃取出的试剂盒，*好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3． 配制各种试剂时，切记混匀！
4． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5． 建议所有标准品、样本都做双份检测。
6． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
【试剂的准备和保存】
A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解混匀后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B．生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体加DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
【操作程序】
1． 确定本次检测所需的已包被DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应*长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
【操作程序总结】：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟
洗板2次，加入生物素化DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液，37℃反应60分钟
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟
洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
【检测范围】：1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】： ＜3pg/ml
【特异性】： 系统和其它因子无交叉反应。
【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]
【有效期】： 12个月（-20℃）。
【用途】： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。
【REFERENCES】
1． PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2． MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3． CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4． SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5． LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6． 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.
DHVD3（1,25二羟基维生素D3），1, 25-dihydroxyvitamin D3，1,25二羟基维生素D3，DHVD3（1,25二羟基维生素D3）是维生素D在体内的高度活性形式，皮肤中的7脱氢胆固醇在阳光或紫外光照射下转化成维生素D3，在肝经25羟化酶系和肾脏1α羟化酶羟化作用下形成DHVD3（1,25二羟基维生素D3），是其在机体内发挥调节作用的基本形式。DHVD3（1,25二羟基维生素D3）是**症活动的天然调节剂，不仅能预防MS的发生，还可降低**的活动度，并且适当的血药浓度还可降低并发症（骨折及肌无力等）的发生。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联**吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体为多克隆DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体。检测相DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体也为多克隆DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)
材料 数量
标准品 96T(2vial)
预包被DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体的96孔板 96T（8×12）
生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体 96T (1:100)
浓缩ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA专用TBS洗涤液 96T×1(1:25)
【需要而未提供的试剂和器材】
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendorf管。
【注意事项】
1． 从-20℃取出的试剂盒，*好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2． 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3． 配制各种试剂时，切记混匀！
4． 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5． 建议所有标准品、样本都做双份检测。
6． 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7． 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的*佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
【试剂的准备和保存】
A. 标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解混匀后做倍比稀释。
稀释后的标准品在2小时内使用。
B．生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素标记DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体加DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。
D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。
【操作程序】
1． 确定本次检测所需的已包被DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应*长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。
【操作程序总结】：
准备试剂，样品和标准品
加入准备好的样品和标准品，37℃反应90分钟
洗板2次，加入生物素化DHVD3（1,25二羟基维生素D3）抗体工作液，37℃反应60分钟
洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟
洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应
加入TMB终止液
30分钟之内读OD值
计算标本待测因子含量
【检测范围】：1000pg/ml→15.6pg/ml。
【敏感性】： ＜3pg/ml
【特异性】： 系统和其它因子无交叉反应。
【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃]
【有效期】： 12个月（-20℃）。
【用途】： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。
【REFERENCES】
1． PARK C W. OH Y S.SHIN Y S Intravenous calcitriol regresses myocardial hypertrophy in hemodialysis patients with secondary hyperparathyroidism 1999.
2． MOHTAI M. YAMAMOTO T Smooth muscle cell proliferation in the rat coronary artery induced by vitamin D 1987.
3． CARTHY E P.YAMASHITA W.HSU A 1,25-Dihydroxy-vitamin D3 and rat vascular smooth muscle cell growth 1989.
4． SHOJI T.NISHIZAWA Y.NISHITANI H Impaired metabolism of high density lipoprotein in uremic patients 1992.
5． LIM P S.HUNG T S.YEH C H Effects of treatment of secondary hyperparathyroidism on the lipid profile in patients on hemodialysis 1998.
6． 0SHOJI T. FUKUMOTO M. KIMOTO E Antibody to oxidized low-density lipoprotein and cardiovascular mortality in end-stage renal disease 2002.
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