**细胞化学（immunocytochemistry）是根据**学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子；抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。

　　常用的标记物有荧光素和酶。荧光素标记的称为**荧光法（immunofluorescenttechnique），常用的萤光素有异硫氰酸荧光素（fluoresceinisothiocyanate）、罗丹明（rhodamine）等。酶标记的称为酶标**法（enzyme-labeled antibodymethod），常用的酶有辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase），酶与底物发生反应后形成不透明的沉积物，从而显示出抗原存在的部位。

　　抗体与抗原的结合方法可分为直接法和间接法两种，直接法是将带有标记的抗体与抗原反应，显示出抗原存在的部位。而间接法则是在抗体抗原初级反应的基础上，再用带标记的次级抗体同初级抗体反应，从而使初级反应得到放大，显示增强。

　　【实验步骤】

　　1、石蜡切片4-5μm；

　　2、切片脱蜡至水；

　　3、3%甲醇双氧水阻断室温10分钟；

　　4、 0.01M(PH 7.2)磷酸盐缓冲液（PBS）洗5分钟´3次；抗原修复，加入0.01M（PH6.0）柠檬酸缓冲液置微波炉中10档3分30秒，之后可进行2档1分至1分30秒微波维持。

　　5、自然冷却后PBS洗，加二抗同种动物非**血清封闭，室温10分钟；

　　6、免洗，倾出血清，分别滴加配制好的一抗4℃过夜；

　　7、PBS洗5分钟 ´ 3次；

　　8、滴加生物素标记的**抗体，室温孵育10分钟；

　　9、PBS洗5分钟 ´ 3次；

　　10、滴加链亲和素-过氧化物酶，室温10分钟；

　　11、PBS洗5分钟 ´ 3次；

　　12、新鲜配制的DAB溶液显色3-10分钟；

　　13、自来水洗，苏木素浅染细胞核，分化。自来水冲洗返兰，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
**组织化学染色方法