液相色谱法分析跌打活络微乳中蛇床子素的含量文章链接：东莞市科迪仪器有限公司www.kedi17.net 目的：建立跌打活络微乳中蛇床子素含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：Diamonsil钻石C18(5μm，250mm×4.6mm)；流动相：甲醇水(80∶20)，检测波长：322nm；流速：1ml/min。结果蛇床子素在0.042~0.336μg线性关系良好，r=0.9997，平均回收率为100.91%，RSD为2.42%(n=6)。结论该法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，可用于该制剂的质量控制。 跌打活络膏是由蛇床子、红花、大黄等几味中药材制成，具有**化瘀、消肿止痛、收敛生肌、舒筋活络的功效，临床用于**跌打损伤、水火伤**、扭伤、挫伤、瘀血疼痛等疗效显著。为了提高疗效，便于患者使用，根据各药材的性质、原制法及作用特点，采用超临界萃取技术提取药材中的有效部位，与**中的挥发油组成油相，并制成O/W型微乳。蛇床子为**中主要**之一，蛇床子素为蛇床子的生物活性成分，为了控制跌打活络微乳的质量，保证药品的质量及临床疗效，本文建立了高效液相色谱法测定蛇床子素含量的方法。 1、仪器与试药 戴安summitP680高效液相色谱仪，summitP680A低压四元泵，PDA100二极管阵列检测器，ASI100自动进样器，summit柱温箱，Chromeleon色谱工作站；ShimadzuLibrorAEL40SM(十万分之一)天平(日本岛津所)；Aquapro实验室级台式超纯化水机(重庆颐洋企业发展公司)。 甲醇(色谱纯)；水(超纯水，临用前制备)；蛇床子素(中国药品生物制品检定所提供，含量测定用，批号：，纯度检查为99.7%)；其它试剂均为分析纯。 2、方法与结果 2.1色谱条件与系统适应性实验色谱柱：Diamonsil钻石C185μm，250mm×4.6mm色谱柱；柱温：25℃；流动相：甲醇水(80∶20)；检测波长：322nm；流速：1ml/min；进样量：10μl。在选定色谱条件下，测得蛇床子素对照品的保留时间约10.3min；供试品色谱中蛇床子素峰与杂峰分离效果良好，分离度大于2.0；理论塔板数按蛇床子素峰计算应不小于3000；阴性对照色谱在相应位置上无干扰峰。 2.2对照品溶液的制备精密称取蛇床子素对照品10.5mg于25ml的棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，制成0.42mg/ml的蛇床子素对照品储备液；再精密吸取此液1ml至25ml的棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.0168mg/ml的蛇床子素对照品溶液。 2.3供试品溶液、阴性对照溶液的制备精密量取本品2ml至10ml的棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取续滤液，即得。另按**比例和样品制备工艺制成不含蛇床子的阴性微乳，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。 2.4线性范围的考察 精密吸取蛇床子素对照品储备液0.25，0.5，0.75，1.0，1.5，2.0ml置25ml的棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀；分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，以峰面积(mAU?min)为纵坐标，进行回归处理，得标准曲线方程：Y=49.75X＋0.3873，r=0.9997；结果表明在0.042~0.336μg范围内，蛇床子素的峰面积与进样量呈良好线形关系。 2.5*低检出限实验 在本色谱条件下，使蛇床子素峰高为仪器响应噪声的3倍高，测得蛇床子素的*低检出量约为0.1mg。 2.6精密度与稳定性实验 精密吸取上述对照品溶液(浓度：0.0168mg/ml)10μl，重复进样6次。依法测定蛇床子素的峰面积，计算RSD=0.26%，说明仪器的精密度良好；另取同一供试品溶液在12h内，每相隔2h进样，依法测定蛇床子素的峰面积，计算RSD=0.84%，表明供试品溶液在12h内稳定。 2.7重现性实验分别精密称取同一批样品5份，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定，计算蛇床子素含量，RSD=1.83%，测定结果说明，蛇床子素含量测定结果重现性良好。 2.8加样回收率实验精密量取6份含量为0.103mg/ml的本品1ml容量瓶中，精密梯度加入蛇床子素对照品溶液(浓度：0.105mg/ml)，按含量测定项下的条件和方法测定，计算回收率。 2.9样品测定 取3批样品，按供试品溶液的制备方法配制，依法测定蛇床子素的含量。 2.10浸膏测定取2.9项下的同批样品的浸膏，称取1/10**量的浸膏重量，用无水乙醇溶解并稀释至100ml。精密量取2ml至10ml的棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm滤过，取续滤液，即得浸膏的供试品溶液。精密吸取10μl进样，测定蛇床子素的含量。文章链接：东莞市科迪仪器有限公司www.kedi17.net