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Pcr技术原理和实验室操作方法
Pcr技术原理和实验室操作方法
PCR是极为重要的DNA增殖技术，应用层面非常广，其中包括了核酸探针的制备。如果一段DNA已经被次选殖至载体上，要以PCR扩增这段DNA时，可根据质体multiple cloning sites两边的序列，选用适当的核酸引子（universal primers） 进行扩增反应；比较常用的引子包括SP6, T3 与T7 promoter primer, M13/pUCforward与reverse primers等；若有特殊考量，也可以使用序列专一性核酸引子对。进行PCR反应时若同时添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP,所增殖的DNA即被32P或DIG所标定，所以PCR是制备核酸探针非常便捷好用的方法。
 技术原理：
标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得CT值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。 产品详情： 
国际**水平的TC988型实时荧光定量PCR仪适用于临床及科研以聚合酶链式反应为特征的、以实时荧光定量检测分析DNA/RNA为目的的病原体检测及基因分析。
动物**检测：禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。
食品**：食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。
科学研究：医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。
应用行业：大学及研究所
方法步骤：
 以下反应条件主要参照PCR DIG probe synthesis kit 制造厂商所提供的产品说明。 
1） 取一支0.5 mL微量离心管，依下表逐一加入各项试剂 （单位 μL）： 
2） 以手指头轻弹管壁使各项试剂混合均匀。
3） 短暂离心后，徐徐加入100 μL 矿物油。 
◆ 有些PCR 反应器不需使用矿物油。
4） 在PCR 反应器上设定PCR 反应条件：Denaturation: 94℃/10 min 
扩增反应：
 30 循环的 [94℃/45 s → 55℃/1 min → 72℃/2 min]
 *后的elongation step:72℃/10 min
 5） 将微量离心管移至反应器上，并开始进行PCR 反应。
6） 反应完成后，以微量移液器吸出矿物油，并取出5 μL PCR 反应产物，进行洋菜胶体电泳分析。
上海领成生物科技有限公司，励志打造国内*大的专业生产经营实验室仪器的厂家。
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