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实时荧光定量PCR存在的问题及应用前景
实时荧光定量PCR存在的问题及应用前景
在real-time令PCR技术中，无论是相对定量还是标准曲线定量方法仍存在一些PCR定量方法均有的问题有侍解决。在标准曲线定量中，标准品的制备是一个必不可少的过程。目前由于无一统一标准，各个实验室所用的生成标准曲线的样品各不相同，致使实验结果缺乏可比性。此外，用:eal-timeqPCR来研究mRNA时，受到不同RNA样本存在不同的逆转录(RT)效率的限制。在相对定量中，其前提是假设内源控制物不受实验条件的影响的，合理地选择合适的不受实验条件影响的内源控制物也是实验结果可靠与否的关键。另外，与传统的PCR技术相比，Real-timeQ-PCR的不足之处是:
(1)由于运用了封闭的检测，减少了扩增后电泳的检测步骤，因此也就不能监测扩增产物的大小;
(2)因为荧光素种类以及检测光源的局限性，从而相对地限制了real-timeQ-PCR的复合式multiplex)检测的应用能力;
(3)目前real-timeQ-PCR实验成本比较高，从而也限制了其广泛的应用。随着技术不断改进和发展，目前real-timeQPCR已成为科研的主要工具，该技术未来的应用前景是令人鼓舞的，一方面real-timeQ-PCR技术与其它分子生物学技术相结合使定量极微量的基因表达或DNA拷贝数成为可能。另一方面荧光标记核酸化学技术和寡核普酸探针杂交技术的发展以及real-time技术的应用，使定量PCR技术有一个足够的基础为广大临床诊断实验室所接受，将有助于临床医生对**的诊断和**。
Real-timeqPCR的发展使得研究人员又多了一种比较简单且自动化的手段去研究许多重要的基础课题。虽然此技术仍存在一些不足需要改进，但是它为real-timeQ-PCR在常规诊断检测中的运用打下了良好的基础oReal-timeQ-PCR将成为未来分子生物学实验室必备的研究工具。
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