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流式细胞仪的光电管和检测系统?
经荧光染色的细胞受合适的光激发后所产生的荧光是通过光电转换器转变成电信号
而进行测量的。光电倍增管(PMT)*为常用。PMT的响应时间短,仅为ns数量级;光谱响应
特性好,在200~900nm的光谱区,光量子产额都比较高。光电倍增管的增益从10到10可连续调节 ,因此对弱光测量十分有利。光电管运行时特别要注意稳定性问题,工作电压要十分稳定,工作电流
及功率不能太大。一般功耗低于0.5W;*大阳极电流
在几个毫安。此外要注意对光电管进行暗适应
处理,并注意良好的磁屏蔽
。在使用中还要注意安装位置不同的PMT,因为
光谱响应
特性不同,不宜互换。也有用硅光电二极管的,它在强光下稳定性比PMT好。
从PMT输出的电信号仍然较弱,需要经过放大后才能输入分析仪器。流式细胞计中一般备有两类放大器。一类是输出信号辐度与输入信号成线性关系,称为线性放大器。线性放大器适用于在较小范围内变化的信号以及代表生物学线性过程的信号,例DNA测量等。另一类是对数放大器,输出信号和输入信号之间成常用对数关系。在**学测量中常使用对数放大器。因为在**分析时常要同时显示阴性、阳性和强阳性三个亚群,它们的荧光强度相差1~2个数量级;而且在多色**荧光测量中,用对数放大器采集数据易于解释。此外还有调节 便利、细胞群体分布形状不易受外界工作条件影响等优点。
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