1肝 2脑 3植物 4心脏 5肌肉 6肺 7肾脏 8手工液氮研磨肝.
实验操作步骤
每50~100mg 组织加入1ml TRIzol
1.加钢珠1颗,60Hz,1min,每种样品基本充分匀浆
2. 将上述匀浆液每1ml TRIzol 试剂用量的匀浆液中加入0.2ml氯仿,盖紧管盖,手动剧烈震摇15 秒钟,然后室温静置2~3 分钟。
3. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
4. 小心吸取上层水相(无色)加入到新试管中,同时计算所吸取的水相体积。不必过多吸取,防止吸入DNA和蛋白杂质(中间层,白色)。
5. 加入所吸取水相等体积预冷的异丙醇,盖紧管盖,轻轻摇匀。
6. 室温静置10 分钟,待RNA 充分沉淀(为减少RNA 降解,此步骤可省略)。
7. 4℃ 10,000g 离心10 分钟。
8. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),每管加入1ml 75%乙醇润洗,盖紧管盖,轻轻晃动试管,以去除残留的异丙醇和盐份。4℃ 7,500g 离心5 分钟。
9. 将上清弃除(注意别丢弃沉淀),打开管盖,将RNA 沉淀干燥(室温挥发或真空干燥)。注意RNA 沉淀不可完全干燥,否则难以溶解。
10. 将RNA 沉淀溶解于适量(20~50μl)的无RNase 水中。如果RNA 沉淀溶解不完全,将使OD260/OD280≤1.6。此RNA 溶液可用于进一步实验,或者-70℃保存