摘要
评估IgG1单抗在不同缓冲液中的稳定性,包括柠檬酸盐、磷酸盐、MOPS和TRIS
改变pH值以确定对抗体稳定性的影响
比较每种缓冲液性能更好的pH值,以确定*佳缓冲条件
尽管部分未折叠数据表明TRIS缓冲液更好,但三态模型的拟合显示MOPS赋予抗体更好的整体稳定性
蛋白质表征的应用**
介绍
重组DNA技术的进步促进了用于**应用的单克隆抗体(mAb)数量的增加。
[1],[2]mAb的高特异性使靶向**具有较少的副作用,并开发出特异性的**传递分子。2
单抗生物制剂的开发包括通过以下方法优化单抗的稳定性:
图1–IgG1单克隆抗体在0 M和6 M盐酸胍下的荧光光谱。光谱中的红移可以用来测量蛋白质的去折叠。
溶液条件的改变。配方过程包括在试验其他赋形剂之前筛选不同的缓冲液和pH条件。2可以改变的溶液条件的数量可以增加进行所有配方试验所需的mAb的时间和数量。
目前,热方法,如差示扫描荧光法(DSF)和差示扫描量热法(DSC)往往是优选,尽管缺点,如非平衡测量和热改变溶剂条件。[3]化学变性具有可逆的优势,平衡测量蛋白质的稳定性。
化学变性是用促潮剂(如盐酸胍或尿素)展开蛋白质,[4]通过测量不同变性剂浓度下未折叠蛋白质的含量,可以确定蛋白质的稳定性。
利用化学变性,利用SUPR-CM荧光平板阅读器,快速测定了一种新型单抗在不同缓冲溶液和不同pH值下的稳定性。平衡条件是通过让制备的微孔板孵育24小时来实现的,如先前针对该单克隆抗体所确定的(数据未显示)。