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  文件名称:  对蛋白质**的机械扰动的强制性降解研究 Forced Degradation of Proteins Through Mechanical Stress
  公司名称:  英国应用光物理公司上海代表处
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  文件详细说明:
 

机械/剪切应力

•使用由ARGEN软件控制的高架悬浮式磁力搅拌棒进行非接触搅拌(3d打印结构,具有廉价且易于获得的组件)

•通过往复式注射泵检查不同管径和成分的毛细管剪切

•由步进电机控制的顶置叶轮进行非接触式搅拌(电机和驱动器价格低廉且易于获得)

•通过蠕动泵从样品杯中再循环蛋白质样品

•通过蠕动泵通过不同过滤材料再循环蛋白质样品

•通过注射器通过二级检测器(MALS、荧光、UV等)从银中连续提取蛋白质样品,以提供补充分析方法

•用自动进样器连续或离散提取蛋白质样品进行GPC分析

非机械/剪切

•使用盐、赋形剂、酸/碱、变性剂等实时直接滴定。

•生成德拜图

•探测主持人:嘉宾互动

非常规实验设备示例

机械/剪切应力

•三维打印机和/或基本加工设备(高架搅拌)

•麦克马斯特卡尔是搅拌小零件的好来源,https://mcmaster.com

•注射泵(毛细管剪应力,通过二次检测器提取)

•蠕动泵(再循环、过滤)

•高效液相色谱管和各种配件

非机械/剪切

•非常规应用程序(如滴定和德拜图)更易于使用数据导出功能进行分析,生成用于外部分析的.csv文件

非接触搅拌

•可连接到仪表控制(左)或通过步进电机独立控制(右)

•搅拌器由连接到不锈钢或聚四氟乙烯轴的磁力搅拌棒、压入盖(仪表控制)或直接插入钻孔聚四氟乙烯盖(步进电机控制)的微型轴承组成

•轴/搅拌器不得阻挡光路(距离单元底部约3-4 m

顶置与接触搅拌

•顶部搅拌导致聚集明显减少

•迄今为止检测的蛋白质显示,相对于接触搅拌而言,重现性大大提高•通常观察到滞后相

注:

•耦合磁搅拌,适用于聚集速度小于500 rpm的样品,

步进电机控制需要更高的转速

毛细剪应力

•利用往复式注射泵在银监控下连续提取/注入样本到试管中

•使用相同长度的管子(1米就足够了)

•直接比较所需样品的起始体积相等

•使用一致的流速

•管道材料和直径会对观察到的聚集率产生重大影响,如AR图所示

管材的作用是

聚四氟乙烯>不锈钢>聚醚醚酮

当应力消除时,搅拌和剪切应力聚集停止

•当压力源消除时,聚集停止

•再次施加压力后,聚集将沿着类似的路径继续

蠕动再循环

•蠕动泵通常被认为施加*小剪切应力

•通过HPLC管通过试管再循环的样品

•水和缓冲控制显示光散射没有增加

•不同蛋白质的稳定性差异很大

蠕动循环w/过滤

耦合至二次探测器

•用于通过HPLC管提取样本的注射泵

•可直接通过检测器提取(MALS、UV、荧光等)

•可连接到GPC的自动注射器(Rheodyne MXP7900)

•在施加压力前开始抽取样本

•将从ARGEN到二级探测器的死体积降至*低

热应力与搅拌应力耦合GPC分析

•通过注射器泵通过自动注射器从反应杯中提取样品

•定期将等分样品注入GPC柱,并进行紫外线检测

•在热应力样品(左)中观察到显著的单体损失和骨料形成,但在接触搅拌应力样品(右)中没有观察到

基于耦合ARGENGPC-MALS的搅拌应力分析

•马尔斯银

辨别群体性质的能力

•角度依赖性随骨料尺寸增加而增加

•能够区分大量小骨料(热应力)和少量大骨料

(搅拌应力)

耦合ARGEN-GPC-MALS热应力分析

•与搅拌应力相比,热应力产生非常大的

角度相关性的微小变化

•MALS数据与GPC数据一致,表明热应力期间形成小骨料


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