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流式细胞仪的参数测量原理
参数测量原理:
流式细胞仪可以多参数测量的同时,信息主要来自特异性荧光信号和荧光散射信号。
测量进行了测量面积,一个测量区域是光和喷气孔板流激光束垂直相交点。流体流动在单个细胞的中心通过测量激光辐照下面积到固体角是2π,整个空间的散射光,散射光在同一波长和入射光的波长。散射光的强度及其空间分布和细胞、形状、大小的等离子体膜和细胞是密切相关的,因为这些内部结构参数和细胞生物光学特性如反射、折射的光关闭。
没有遭受任何损坏的细胞有散射光的特点,因此可以使用不同的散射光信号分析的活细胞染色和整理,不固定和染色细胞**而改变的光学特性,其散射光信号,当然,不同于活细胞。散射光不仅是相关的细胞为中心的散射参数,也与散射角,并收集散射光的非生物因素,如固体角。
流式细胞术在测量,常用的是方向的两种散射光散射测量:
(1)远期角(0)散射(FSC);
(2)侧散射(SSC),也被称为90角散射。
这时什么角指的是激光束的方向,收集散射光信号的光电倍增管之间的夹角约为轴向方向。
一般来说,前散射光强度的角度和细胞与细胞的大小相同的组中细胞的横截面积增加;活细胞的球形实验表明,范围内的小立体角,基本上成线性关系横截面积的大小;对于复杂形状是取向的细胞可能差异很大,尤其需要注意。
侧向散射光测量主要用于检索相关信息关于自然的内部精细结构的颗粒。
侧向散射光与细胞的形状和大小,但它是更敏感的折射率细胞膜,细胞质、核膜,也可以大颗粒的细胞质是敏感的反映。
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