酶联斑点分析仪检测细胞因子的三大优点

    实验设计在96孔培养板上进行，直接以培养板的塑料板底或者PVDF膜以及硝酸纤维素膜为基质，包被上特异性的单克隆抗体，用以捕捉细胞分泌的细胞因子。（由于涉及到细胞培养的过程，对单克隆抗体的要求要远高于ELISA中的捕捉抗体，该抗体需要无毒，不含内**，亲和力高等特点。）之后，在培养板的孔内加进细胞培养基（现在无血清ELISPOT技术已经成熟，培养基中可以不再含有血清）、待检测的细胞以及抗原刺激物进行培养。

    在特异性的抗原或者非特异性的有丝分裂原的刺激下，数小时之内，T细胞就会开始分泌各种细胞因子。细胞因子立即就被位于细胞下方的膜上的单克隆抗体所捕捉。在洗往细胞之后，被捕捉的细胞因子可以与生物素标记的**抗体结合，然后用酶标亲和素再与生物素结合，进行化学酶联显色，就可以在膜的局部形成一个个圆形的斑点。每一个斑点就对应了当初一个分泌细胞因子的细胞，这些细胞被称为斑点形成细胞（Spots forming cells SFCs）。统计膜上的斑点的数目，再除以当初加进孔内的细胞总数，就可以计算出阳性细胞的频率。