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荧光Elispot图像分析仪的必要性

我们知道，通过荧光Elispot图像分析仪可以提供阳性细胞频率的数据。也就是说，在给定细胞群体当中，我们可以知道有多少细胞在分泌细胞因子。但是另一方面，我们也希望知道这些细胞分泌细胞因子的相对数量。尤其是在经过某些处理的情况下，阳性细胞的频率没有变化，但是细胞的平均分泌量增加了。我们也希望ELISPOT检测能够提供这方面的数据。这种数据的获得就依赖于ELISPOT 图像分析仪的斑点光密度分析功能。手工计数是无法获得的。

那么，如何来确定每个斑点代表的细胞因子数量呢？显然斑点的面积可以作为一个度量，细胞因子分泌越多，斑点就越大。反之亦然。另外，斑点颜色深浅（也称为：光密度）也可以作为一个度量，细胞因子分泌越多，斑点颜色就越深，反之亦然。打一个简单的比方，把一个斑点比作一座山峰，斑点的面积就是山峰的占地面积，斑点的深浅就是山峰的高度，细胞因子的总量就是山峰的体积。那么经过一个简单的数学微积分处理，就可以根据每个面积单元的高度而把山峰的重体积积分出来。ELISPOT斑点光密度定量就使用的这个原理。

这是BioReader 4000光密度分析报告。它可以提供的信息有：孔的位置、每孔的斑点数目、该孔斑点的平均光密度（Average Opt. Density）、该孔斑点的总面积（Cumulated values area）、该孔相对细胞因子分泌总量（TOD，即光密度总值）。

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