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使用Elispot分析仪的工作原理有哪些

 随着生物医学研究的快速发展,特定细胞活动的监测变得愈发重要。Elispot(酶联免疫斑点法)分析仪作为一种高效的细胞免疫功能检测工具,因其高灵敏度和定量能力,在多种研究领域得到了广泛应用。

Elispot分析法主要用于检测单个细胞生成特定细胞因子的能力。Elispot分析仪的其工作原理主要包括以下几个步骤:

1. 细胞捕获与固定:在开始实验时,先要选择目标细胞,如T细胞、B细胞或其他免疫细胞。将这些细胞接种到涂有抗体的微孔板中,这些抗体能够特异性结合于目标细胞表面。当细胞产生相应的细胞因子时,这些因子会被涂在孔内的抗体捕获。

2. 细胞因子的释放:细胞经过一定的培养时间,释放出其产生的细胞因子。这些细胞因子一旦释放,便会与微孔板表面的捕获抗体结合,形成免疫复合物。

3. 二抗结合:为了进行可视化,接下来需要加入标记有酶的二抗。这种二抗可以与已结合的细胞因子—抗体复合物特异性结合,形成一个稳定复合物。

4. 显色反应:之后加入底物,使得与二抗结合的酶发生反应,产生有色沉淀。此时,每一个存在细胞因子的点(spot)就会在微孔板上形成一个可视的反应斑点。

5. 结果分析:通过专用的Elispot分析仪或显微镜,对形成的斑点进行计数和分析。每一个斑点代表一个分泌了特定因子的细胞,可以定量分析细胞因子的水平。