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如何选择紫外分光光度计 ?
主要考虑光学构造、光谱范围、样本类型和分析工具。
研究者们有众多的新紫外光分光光度计可选。自从60年前紫外分光光度计出现在试验室的工作台之后,这种能解决广泛难题的仪器可以从单一波长的量测到高性能多光谱进行量测分析。科学家们选择时须要根据自己试验室的须要和目的用途来考虑,光学构造和光源、探测方法、样本类型和数据处理等都是要考虑的因素。
光学构造(OPTICAL CONFIGURATION)
一般来说,紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义,单光束型主要是依赖单束光进行量测。一束给定波长的光通过对照物,然后再通过实际样本溶液,就能得到吸光结果。
双光束型则是通过一个斩光轮(mirrored chopper wheel)将一束光分成两束,分别量测对照样本和 实际样本。可以*小化光漂移(lamp drift)和减少量测时间。一些双光型光度计不利用斩光轮,而是利用一种光束分光器来代替,将一束光分成两束平行的光然后同时量测对照样本和目的样本。因为增加了量测的速度,所以双光束分光光度计在量测一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。
光源和检测方法(LIGHT SOURCES AND DETECTION)
分光光度计的光谱也是须要考虑的一个重要因素。试验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者**的生长情况。例如Amersham Biosciences of Piscataway公司的GeneQuant II能在230、260、280、320、595和600nm的波长下量测样本。果果须要更大的灵活性,研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器,可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。
紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长,通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究须要的光谱范围。Varian of Palo Alto公司的Cary Deep UV和Hitachi High Technologies of Tokyo的U-7000 Automated Vacuum UV System就是这样的仪器。
一些仪器具有多种光源供选择:紫外光、可见光和甚至红外光(780 nm 至3,000 nm)。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分(大约380 nm 到800 nm)。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。
分光光度计的带宽(bandwidth)很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出试验**要求的光谱。一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光量测。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种试验须要。
为了量测吸光值,分光光度计制造商通常使用光电倍增管(photo-multiplier tubes,PMTs)和光敏二极管。PMTs提供快速的反应时间和良好的灵敏度,并且可以在紫外光谱调节至特定的范围。但一些制造商依赖于光敏二极管的动态范围在数秒内行使所有的光谱量测。
样本类型(SAMPLE FORMAT)
在大部分的样本类型中,分光光度计可接受样本孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。微孔板主要是满足高通量的须要和大规模的试验室需求。但尽管对于小试验室来说,制造商仍然提供了多种容器转换器来满足通量的要求和减少试验时间。
用小试管cuvette装样本容量一般从1 μl-5ml,并且一些仪器装备了各种样本固定物来满足各种改变须要。体现了柔韧性。
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