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抗体纯化推荐使用的方法

抗体纯化推荐使用的方法
纯化抗体 通常用于直接检测抗原。此时抗体标记有一个易于鉴定的标记物，用于结合和检测所研究的抗原。在间接检测抗原方法中，一抗不被标记，而是用标记的二抗（一种抗**球蛋白抗体）来检测。一般而言，建议使用间接法。因为许多商家能够提供可靠的标记二抗，用间接法不仅省力，结果同样可靠。

尽管如此，有几种方法需要标记的**抗体。例如，在**染色试验中，需要研究2个或2个以上抗原的相对位置时，常需要纯化抗体并用不同标记物标记，这样能比较它们的相对位置。此时使用间接法不合适。��为间接法是用标记二抗来给未标记的一抗定位。又如，有时一抗需要标记，而该样本中又有大量无关抗体，它们能干扰对一抗的检测，此时用间接法也不合适。用鼠源性单抗对鼠组织抗原进行定位时，也会出现这种情况。此时需要纯化一抗，并直接按下述方法进行标记。

**亲和纯化是另一种可能需要纯化抗体的技术。在这一技术中，抗体共价交联到一固相基质上，如交连的琼脂糖或聚丙烯酰胺微球。常用的方法是，先将抗体纯化，然后连接到通过化学方法激活而具有结合位点的微球上。此时，抗体的纯化对实验的成功至关重要。

还有一种需要纯化抗体的试验，是从多克隆抗血清中分离抗原特异性抗体。多克隆血清中含有复杂多样的抗体，它不仅含有针对**原产生的抗体，还有血清的全部抗体。出于特定目的的需要，必须将抗原的特异性抗体分离出来。例如使用抗肽抗体时，需要分离出特异性识别肽段的抗体。通过纯化能获得特异性很高的抗体。纯化抗体的另一用途是降低本底。几乎在所有技术中，使用纯化抗体都能降低非特异性本底。产生这种效果主要是因为一方面能去除引起实验误差的污染蛋白，另一方面能**控制实验中产生阳性信号的抗体量。使用纯化抗体不会使本底增加，因此纯化抗体可以作为所有**化学实验中降低本底的基本手段。

抗体的纯化通常是浓缩抗体的*简单方法。任何来源的抗体可以用蛋白A或蛋白G的纯化方法来浓缩。

尽管纯化抗体的方法较多，建议用蛋白A或蛋白G微球纯化法作为*常用的方法。这种方法效率高，能为常用的实验方法提供足够纯化的抗体，而且随着商品化的蛋白A和蛋白G基质的出现，能将任何来源的抗体纯化。抗体的纯化也可采用传统的色谱法，在某些情况下非常有用。这些方法包括DEAE离子交换色谱法、硫酸铵沉淀法及其他方法。但是用蛋白G或蛋白A亲和柱法纯化较其他方法简单，并且纯化效果是其他方法的数倍。因此在所有方法中，我们推荐这种方法。

有一种情况不适于应用蛋白G或蛋白A亲和柱纯化抗体，即多克隆抗体需要进一步分离，且针对某种特异性抗原的组分需要分离。此时可用抗原结合的亲和柱纯化抗原特异性抗体。这一特殊的纯化方法，将在后面讨论。

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