器内冷空气先由排气阀驱出，继则蒸汽出现，待有大量蒸汽逸出时（呈白色雾状气流）即可认为器内冷空气已排尽，关闭排气阀，此后器内压力逐渐升高，直至压力表指在所需的压力数字（如15磅/吋2或105Kg/cm2），调节**活塞，使器内压力在此数字上（下）能自动开放（关闭），以保持在此压力情况下维持20~30min，**时间到后，停止加热，待器内压力自行降至“0”，打开排气阀，使器内外压力完全一致，打开器盖取物。
高压蒸汽**法是*可靠的**方法，凡耐高热和潮湿的物件，如培养基、生理盐水、棉织品、传染性污物及废弃的**培养物等均可用本法**。
图5-1 手提式高压蒸汽**器 3．注意事项：必须加足规定水量，冷空气必须排尽，器内仍有高压时不得开排气阀、**阀，更不得松开螺旋开盖！根据物品的大小、性质，可适当增加**时间，以保持彻底**。
欲检查器内压力与温度是否符合，可用熔点与所需检查的温度相一致的化合物装入试管中，经减压熔封后，放入锅中一起**。**完毕，取出试管观察化合物是否熔化，即可判定。（一般用硫碘检查器内温度是否达到121℃）。 （二）紫外线**法（示教） 【原理】
波长为240~300nm的紫外线（ultraviolet ray,UV），包括日光中的紫外线，具有**作用，其中以260~266nm的紫外线**作用*强，这与DNA的吸光谱范围一致。其主要作用于DNA，使一条DNA链上两个相邻的胸腺嘧啶以共价键结合，形成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录，导致**的变异或死亡。紫外线不仅可杀灭DNA病毒，也可杀灭RNA病毒，如对SARS-COV有灭活作用。但紫外线穿透力较弱，一般的玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故一般用于手术室、传染病房、无菌实验室的空气**，或不耐热物品表面的**。
【材料】
1．大肠埃希菌肉汤16~24h培养物
2．琼脂平板二个、**的三角纸片、镊子
【方法】
1．用接种环蘸取大肠杆菌液在两个普通琼脂平板上，划一“+”形（每平板放两环），然后来回均匀涂布于整个平板表面。
2．将镊子通过火焰**后，夹取无菌的三角纸片一张，置于一琼脂平板中央，然后将平板打开，平放在距紫外线灯60~100cm处照射30min。
3．另一琼脂平板，在紫外线下用玻璃盖遮住平板的一半，同样照射30min。
4．照射完毕，用经火焰**后的镊子将纸片取出投入**缸中，盖好琼脂平板，放37℃温箱孵育24h观察结果。
【结果观察】
经培养后，观察记录结果并加分析。 
图 5-2 紫外线**法（三）滤过**法（示教） 是用物理阻留的方法除去液体或空气中的**，达到无菌的目的。滤菌器含有微细小孔，只允许液体或气体通过，而大于孔径的**等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温**的血清、***、培养基及空气等的**（但不能除去更小的病毒、支原体和某些**L型）。滤菌器种类很多，常用的是玻璃滤菌器和石棉滤菌器（亦称Seitz滤菌器），本试验主要使用薄膜滤菌器：由硝基纤维素膜制成，依孔径大小分为多种规格，用于**的滤膜孔径为0.22μm。 | 