***效价的微生物检定室用途及要求：***效价的微生物检定室用途在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测***对微生物的抑制作用，计算***活性（效价）。
***效价的微生物检定室用途及要求《中国药典》[1]对***效价的微生物检定室的环境洁净度未有明确规定要求 在国家食品药品监督管理局2000年9月颁发的《药品检验所实验室质量管理规范（试行）》中第十八条中规定有“***微生物检定实验室分为半无菌操作间和缓冲间。半无菌操作间设有紫外线灯，操作台宜稳固，并保持水平。实验室内应光线明亮，并有控制温度、湿度的设备”。通常按洁净度100 000级设计。
仪器用具与试药
双碟、陶瓦盖、钢管（牛津杯）、钢管放置器、抑菌圈测定仪、超净工作台、恒温培养箱、滴管、天平、玻璃容器、天平、一次性塑胶手套2.1.1.1 仪器与用具***效价的微生物检定操作室：光线明亮，操作室应分为两部分，彼此分开，其中一部分为一般操作室，一部分为半无菌操作室。半无菌操作室应设有紫外线**灯，并附设空气净化（空气净化级别为100～10000级）及空调设备，控制室温度在20~25℃之间，达到无菌或半无菌状态。操作台应稳固，台面用玻璃板，并用水平仪调节至水平。注意操作，避免室内***污染。
双碟：内径约90mm高16～17mm硬质玻璃或塑料培养平皿，碟底厚薄均匀，水平透明，无色斑气泡。碟底平度检查，可将双碟放在水平台上，下垫一张白纸碟内加水2～3ml，再滴加蓝墨水，观察蓝色深浅是否一致。陶瓦盖：内径约203mm，外径108mm，平坦，吸水性强，应定期清洗、干燥或干热**。钢管：内径（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外径（8.0±0.1）mm或（7.8±0.1）mm，每套钢管重量差异不超过±0.05g，内外壁及两端平坦，管壁厚薄一致。每次使用后应置1:1000新洁尔灭溶液内，浸泡2h以上，**后再洗涤，先用水洗涤，超声波超声30min后用沾有去污粉的纱布条串擦内外壁，水冲洗，沥干，再用蒸馏水冲洗3次后，置带盖的容器内，在150～160℃干热**2h，备用。钢管放置器（牛津杯）：有6孔和4孔两种。放置于无菌或半无菌的操作平台上，钢管下落时应垂直平稳、位置正确。双碟升降平稳。应保持清洁，防止***污染。可定期用75%乙醇棉擦拭落管筒及储管杯。置钢管的玻璃管应定期干烤**。恒温培养箱：以隔水式为宜，温度平稳，波动小。除另有规定外，依各品种项下要求设定温度，温度波动范围为35～37℃或24～26℃，箱内网状隔板上放置带孔的玻璃板并调节至水平。**刻度吸管： 用于吸取菌液及培养基。用后应立即置5%石炭酸或1:1000新洁尔灭溶液中**后，再按玻璃容器的常规洗涤法洗涤。洗涤沥干后在吸口处塞入脱脂棉（松动、透气），置适宜容器中，在120℃以上干热**2h或121℃蒸气**30min，烘干备用。 玻璃容器：包括定量移液管、刻度吸管、容量瓶等，均应符合“常用玻璃量器国家计量检定规程”的规定。每次使用前用清洁液浸泡，水冲洗，并用蒸馏水或去离子水冲洗3次，沥干。称量瓶：重量在10g以下。用毕先用水冲洗，沥干，置清洁液浸泡2h以上，然后分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置洁净平皿中，在120℃干热**3h，待冷置60～70℃时，取出置于干燥器中备用。 滴管：用玻璃管拉制，管口平滑。使用前在清洁液浸泡，分别用水、蒸馏水或去离子水冲洗3次，置适宜容器中，在120℃干热**3h后，备用。天平：分析天平，精密度0.1mg，经计量检定。抑菌圈直径（面积）测量仪： 应符合“抑菌圈测量仪检定规程”的规定。游标卡尺：精度0.02mm，长度150mm。超净工作台： 有效工作面局部洁净度100级。用于试验菌的接种传代或菌悬液制备。超净工作台须置洁净工作室或半无菌室内。
***微生物检定方法
***微生物检定法系在适宜条件下，通过检测***对微生物的抑制作用，计算***活性(效价)的方法。依试验设计原理不同，可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。后二者被列为***微生物检定的国际通用方法。中国药典也采用这两种方法。
***微生物检定管碟测定法系琼脂扩散法，是利用***在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度***球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。此法系根据***在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈直线关系而设计，通过检测***对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
***微生物比浊法是将一定量的***加至接种有试验菌的液体培养基内，混匀后，经培养，测量培养基的浊度。此法系根据***在一定的浓度范围内，其浓度或浓度的数学转换值与试验菌生长产生的浊度(浊度与**数量、**群体质量及**细胞容积的增加之间存在直接关系)之间存在线性关系而设计，通过测定培养后**浊度值的大小，比较标准品与供试品对试验菌生长抑制的程度，计算出供试品的效价。 ***效价以“单位(u)”或“微克(μg)”表示。
管碟法的操作步骤：
1、预试验：确定*佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、***终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。
2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及**；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外**等。
3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。
4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。
6、滴加***溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。
7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。
8、抑菌圈的测量：抑菌圈测量仪的使用，每组试验双碟应在相同的测量参数下进行测量。手工测量：游标卡尺
9、结果的可靠性检验及效价测定：抑菌圈测量仪提供计算结果或手工计算结果。
