2.1 啤酒有害**检测培养基(NBB)
市面上的NBB培养基有以下三种形式:琼脂培养基、培养液和浓缩培养液。
NBB中含有的营养和生长物质,以及添加的特殊促进生长物质能够迅速可靠的检出啤酒中的所有有害菌。因为,检测时间取决于许多因素(如微生物含量、**种类、啤酒的适应程度、生理状况、微生物来源等),所以,当污染较重时,可能只需培养1天即可;反之,当污染仅在痕迹量范围或微生物生长特别缓慢时,则需要培养数天。
2.1.1 NBB琼脂培养基主要用于进行膜过滤,酵母样可直接在上面划线,培养基中所含的指示剂氯酸红会因为有产酸的**而变色。菌落周围形成一黄色晕圈,若酵母太稠,会由于其自溶产物而防碍指示剂变色。培养时,置于二氧化碳环境中28℃,培养5天以上。
2.1.2 NBB培养液分装到无菌试管中。过滤膜可卷成条形插入试管,酵母样可直接加进去(约0.5mL酵母混入10mL培养液中)。须注意的是,同样要防止酵母的自溶而干扰培养基的变色。培养时间同样在5天以上,但不一定要置于二氧化碳环境中。
2.1.3 NBB浓缩培养液对处理后酵样比较合适。使用时,先将大约7mL浓缩液加入180mL无菌取样瓶。接着,进行无菌取样操作。取样瓶可能会因为泡沫太多而取不满样品,那么,应等泡沫消失完,再在剩余空间用无菌水布满,以排除氧气,同时进行稀释浓缩液,进行充分混匀。
通过在下部沉积的部分沉淀,用显微镜就可观察到**生长繁殖情况(一般,在视野中会出现一个或多个可疑细胞,如果细胞为单个形式,则表明此微生物为死细胞或无害微生物)。
同样,含酵母的前酵或后酵啤酒可以非常方便地用NBB-C培养基来检测。当然,浑浊样品也可以直接采用NBB-B培养基来检测。利用无菌取样瓶夺取大约1mL样品,静止一段时间使酵母沉降,从下面用无菌吸管或无菌棉签取大约0.5mL样品,注入70%的NBB-B培养液,培养过程进行封盖并保持松开状态,以方便二氧化碳的溢出。