KHB ST—360 酶标仪SOP基 本 理 论
一、 酶**方法
（一）基本概念
抗原：凡能刺激机体产生抗体的物质称为抗原，如**、病毒。
抗体：指人体**系统在受到抗原刺激后所分泌的一种特异针对抗原的**球
蛋白。
酶： 指一种具备特异催化活性的蛋白质。
底物：酶的特异的作用物。
（二）酶**测定（EIA）
**三大标记技术之一，是用酶标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应的一
种方法，通过酶标仪测量底物被酶分解后的显色深浅来检测样品中的抗原
或抗体的含量。ELISA 是EIA 的一种测量模式，常见有二中模式，分别
为双抗体夹心法和竞争法。
（三）酶联**吸附反应（ELISA）
1、原理：
（1） 固相载体经物理吸附或化学交相结合抗原或抗体并保留抗原或抗体的免
疫活性。
（2） 抗原或抗体与酶结合成复合物时，仍具有抗原或抗体**活性及酶催化活
性。
（3） 结合在**复合物上的酶能催化底物水解，氧化或还原生成有色物质，酶
活性与呈现的色泽成正比，因而根据显色程度，可检测抗原抗体的量。
2、二种基本模式
（1） 双抗体夹心法
2
洗涤 * 洗涤 底物
+待测血样 显色
*
洗涤 洗涤 底物
无色
（2） 竞争抑制法 *
洗涤 洗涤 底物
+ 待测样本 无色
洗涤 * 洗涤 底物
显色
抗原抗体之间的亲和力，与它们空间构型的互补程度，温度，PH 都有很大关系，
在酶免反应中可根据**复合物的量来推算相应抗原或抗体的含量。
3、主要应用（以二对半为例）
（1）双抗体（原）夹心法：HbsAg、HbsAb、HbeAg
（2）竞争法：HbeAb、HbcAb
二、 光学分析
（一） OD 值的概念：每一种物质都有不同的吸收光谱，吸收峰的波长位置，吸
收峰的数目，吸收峰的相对强度及形状是对物质进行定性与结构分析的依
据，而对于同一物质的不同浓度，具有相同的吸收峰位置，但强度不同浓
度越高，吸收峰越强。
朗伯-比尔定律：OD=KCL=lg I0/IL
K：吸光系数；
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C：溶液浓度；
L：液层厚度；
I0：入射光强度；
IL：出射光强度。
K 还与波长及被测物的性质与温度有关，是物质的特征常数。
可见光区：400-750nm；
近紫外： 200-400nm。
（二） 滤光片的选择
实验使用的酶 溶液的颜色 选择滤光片
仪器基本配置：405nm、414nm、450nm、492nm、546nm、578nm、630nm
和690nm。
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编 制 测 量 程 序
步骤：设置“测量方式和计算方式” 储存所编程序 使
用时再调出程序。
（一）定性测量
简单的定性测量（如固定单/双限值）及（需输入极限值公式），可在当前
任何状态下设置。
1、编程：按上述“步骤”先进入“测量方式”和“计算方式”依次设定
相应参数；
2、储存：在当前编程状态下，按功能键选“存储当前内容”，再设置程序
号；
3、调出：按功能键选“调用已存内容”，再输入程序号，调出相应的程序。
例 1：科华试剂：主波长450nm，次波长630nm，极限值计算公式为：2.1*0.05
（N≤0.05 时）；2.1*N（N>0.05 时）。单孔空白，位置为A1，2 个阴阳性
孔A2、A3。
程序（1）：2.1*0.05（N≤0.05）
步骤：
1、先按“测量方式”键，选定2“双波长检测”。
屏幕显示：
2 双波长检测
波长值 A405 B414 C450 D492
E540 F570 G630 H690
当前波长值：405
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再选择 C 键,确定，这时屏幕下方显示：
选择 G 按确定，630；屏幕显示：
按“2”键，屏幕显示：
按 A；1 键；屏幕下方显示：
按“确定”键，屏幕下方显示：
因是“多孔空白”，这时按“确定”键，返回主菜单。
当前**波长值：450
2 双波长检测：
空白方式：1、无试剂空白
2、多孔试剂空白
3、列空白
4、行空白
2 双波长检测——多孔试剂空白
当前空白位置：
当前空白位置：A1
当前空白位置
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2、按“计算方式”键后，选择“5”，屏幕显示：
按“1”，屏幕显示：
输入极限值：0.105+0.15（灰区）；即0.255
按“确定”后，返回主菜单；屏幕显示已设内容：
3、按“功能”键，选择“4”存贮当前内容，屏幕显示：
5 单限检测法
极限值处理：1、极限值输入
2、极限值计算
极限值=A*阳性值+B*阴性值+C
当前极限值处理：1、极限值输入
5 单限检测法
极限值=0.000
当前极限值：
当前测量方式：2 双波长检测
波长值：450、630
空白方式：多孔试剂空白
空白孔：A1
准备就绪……
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用↑、↓来选择A 或B，这里选择A，按“确定“，屏幕下方显示：
输入（1……50）中的任一数，这里选择“1”，按“确定”后，屏
幕回到主菜单。
4、在保存检测设置程序前，还可以设置进样方式，按“功能”键，选
择“1、样品盘运动”，屏幕显示：
从上述方式选择 A，按“确定”，屏幕返回主菜单。
5、放入酶标板，按“开始”，就可以进行测试。测试结果可在屏幕上
显示，也可以由打印机打出。
程序（2）：2.1*N （N>0.05）
4 存储当前内容……A
A 存储当前设置程序
B 存储当前测量结果
（1……50）存储位置
当前方式：A 存储当前设置程序
当前存储位置：
1、样品盘运动方式
A 连续进盘：不振动
B 连续进盘：振动
C 步进进盘：不振动
D 步进进盘：振动
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1、重复执行程序（1）所设的“测量方式”；
2、按“计算方式”键后，选择“5”，屏幕显示：
按“2” 极限值计算, 屏幕显示：
分别输入 A：“0”，“确定”；B：“2.1”，“确定”；C：“0.15”，“确
定”。其中C=0.15 为灰区，其值的大小可根据各仪器及试剂的情况
自由调整。屏幕显示：
按“**”去除原先设定的阴阳性位置，接着按“+/—”键选出“—”
号，再按“A”、“2”输入阴性对照位置，按“确定”；随后选出“+”
号和“A”、“3”，输入阳性对照位置，按“确定”后屏幕显示：
5 单限检测法
极限值处理：1、极限值输入
2、极限值计算
极限值=A*阳性值+B*阴性值+C
当前极限值处理：1、极限值输入
5 单限检测法……极限值计算
极限值=A*阳性值+B*阴性值+C
A=0.000
B=0.000
C=0.000
当前参数 A：
5 单限检测法……+A1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
当前阴阳性位置：
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3、按“功能”键，选择“4”存储当前内容，屏幕显示：
用↑、↓来选择A 或B，这里选择A，按“确定“，屏幕下方显示：
输入（1……50）中的任一数，这里选择“2”，按“确定”后屏幕
回到主菜单。
例 2：某试剂主波长450nm，次波长630nm，用竞争法模式，计算公式为：
（P+N）/2；单孔空白，位置为A1，二个阴阳性对照孔A2、A3。
步骤：
1、“测量方式”中的设定同例1 所述；
2、按“计算方式”键后，选择“5”，屏幕显示：
当前测量方式：2 双波长检测
波长值：450、630
空白方式：2 多孔试剂空白
空白孔：A1
准备就绪…… 02/08/30
4、存储当前内容……A
A 存储当前设置程序
B 存储当前测量结果
（1……50）存储位置
当前方式：A 存储当前设置程序
当前存储位置：
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按“2”，屏幕显示：
分别输入 A：“—”、“0.5”、“确定”；B：“—”、“0.5”、“确定”；C：
“—”、“0.15”、“确定”；其中选择“—”为竞争法，C=0.15 为灰
区，其值的大小可根据各仪器及试剂的情况自由调整。屏幕显示：
按“**”去除原先设定的阴阳性位置，接着按“+/—”键选出“—”
号，再按“A”、“2”，输入阳性对照位置，按“确定”，随后选出
“+”号和“A”、“3”，输入阳性对照位置，按“确定”后，屏幕
显示：
5 单限检测法
极限值处理：1、极限值输入
2、极限值计算
极限值=A*阳性值+B*阴性值+C
当前极限值处理：1、极限值输入
5 单限检测法
极限值处理：1、极限值输入
2、极限值计算
极限值=A*阳性值+B*阴性值+C
当前极限值处理：1、极限值输入
5 单限检测法……+A1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
当前阴阳性位置
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4、按“功能”键，选择“4”存储当前内容，把当前内容存储到位置
“3”后，按“确定”。
当前测量方式：2 双波长检测
波长值：450、630
空白方式：2 多孔试剂空白
空白孔：A1
准备就绪…… 02/08/30
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KHB ST—360 酶标仪装机步骤
开箱验机装机
操作测量
给用户培训
为用户编写程序并保存
用户自行测量验证
用户确认通过
填写保修卡
装机人员带走装机报告、维修卡回执
装机完成
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KHB ST—360 酶标仪操作简明步骤
打开仪器电源开关
仪器自检
按功能键调出测量程序
打开打印机电源
按开始键测量
注意事项：
1、为保证酶标仪的稳定性和准确性，应避免干扰光学系统的任何部件，避
免任何液体流入仪器内部；应防尘、防止其它外源性物质；不可用手触
摸透镜表面、滤光片、光电检测器。
2、一定要遵守“先开酶标仪后开打印机，先关打印机再关酶标仪”的原则。
3、为延长灯泡使用寿命，如未使用，不要长时间开酶标仪。