凝胶迁移或电泳迁移率实验 (electrophoretic mobility shift assay, EMSA)是一种体外研究DNA结合蛋白(转录因子)和其相关的DNA结合序列(靶标基因的启动子序列)相互作用的技术,可用于定性和定量分析。
EMSA,知其所以然!
正如上方实验示意图所示, 蛋白质可以与核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。通过竞争性对照组,可以验证实验的特异性。
EMSA,难点与痛点
EMSA实验是很多实验新手的拦路虎,不仅实验步骤繁琐(凝胶电泳,转膜,紫外交联,信号检测),而且实验与对照组较多(通常为5组,标记探针、标记探针+蛋白、标记探针+蛋白+未标记探针(特异竞争寡核苷酸)、标记探针+蛋白+未标记突变探针、标记探针+蛋白+抗体),经过多次测试优化才能获得理想的实验结果,综合成本非常高。
突破EMSA,**的新方法,Nature为您测试:
作为表观遗传学的专业解决方案供应商,艾美捷科技为您推荐,Epigentek品牌**推出的通用蛋白-DNA结合分析试剂盒(比色法):
产品名称及描述
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品牌
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货号
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产品说明
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EpiQuik General Protein-DNA Binding Assay Kit
通用蛋白-DNA结合分析试剂盒(比色法)
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Epigentek
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P-2004
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详情
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* 客户需自行准备如下材料:[1]生物素标记的特异性探针; [2]未标记的特异性探针;[3]目标蛋白的一抗与HRP-二抗
通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒原理:
通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒(比色),用于测量核提取物中转录因子与DNA结合活性。在实验中,含有靶向转录因子的DNA结合共有序列的生物素标记的双链寡核苷酸(寡核苷酸)与结合试验缓冲液中的核提取物一起温育。核提取物中活性形式的转录因子与其共有序列结合。然后将寡蛋白复合物捕获到测定微孔上。靶蛋白可以通过高亲和力抗体识别,并通过检测抗体 - 显色试剂反应系统进行比色测量。
产品特点与优势:
1. *快的程序:完整的检测可在3小时内完成。
2. 可拆卸微孔板,使测定灵活:手动或高通量分析。
3. 比色法分析,无放射性材料,更**。
4. 简单,可靠,一致的检测条件。
Nature文章发表结果:
《Klengel, Torsten, et al. "Allele-specific FKBP5 DNA demethylation mediates gene–childhood trauma interactions." Nature neuroscience 16.1 (2013): 33.》
rs1360780基因的A/G等位基因与TBP的结合能力分析,A等位基因的亲和力明显高于G.
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* 通用蛋白质-DNA结合分析试剂盒说明书:点击下载
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