多重PCR(multiplex PCR),又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应。其反应原理,反应试剂和操作过程与一般PCR相同,但多重PCR和在很多应用中有巨大的优势,深受分子诊断领域研究者与开发人的喜爱:
1.高通量 (每个反应孔可分析更多样本,产出显著提高)
2.更低的样本用量和试剂用量(特别适合**样品,降低成本)
3.更高的实验精度,使加样精度错误*小化
目前多重PCR也面临着一些问题:
1.PCR通常需要充分优化退火条件,以便对不同的引物–模板系统实现**效率的扩增。这种类型的PCR经常受到非特异性PCR产物的影响。严格的热启动程序和特别优化的缓冲溶液系统对于成功的多重PCR优良是非常关键的。
2.多重PCR所面对的另外一个挑战是,不同的引物对之间,杂交动力学性质不同。结合效率更高的引物能更充分的利用PCR反应试剂,从而导致其它PCR产物的减少。这通常会导致一些本应该被扩增的产物没有出现。有一些商业化的试剂盒经过特别的设计,可以避免这种情况。
Real-time RT-PCR可以通过一步法或者两步法完成,两者各有优劣。一步法快速的流程,可以迅速的处理多个样本,并且易于实现自动化。操作步骤的减少提高了不同样本结果的可重复性,并且由于减少了操作,降低了样本被污染的风险。
为此,我们推荐使用Solis BioDyne研发的高灵敏度、高特异性、高稳定性的一步法多重PCR试剂盒-(基于探针),SOLIScript 1-step Multiplex Probe 试剂盒系列产品:
名称
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货号
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兼容的PCR仪器
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不兼容的Probe报告染料
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SOLIScript 1-step Multiplex Probe Kit
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08-55-00250
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所有PCR仪器;但Applied
BioSystems™和Agilent除外
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SOLIScript 1-step Multiplex Probe Kit (ROX)
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08-59-00250
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Applied
BioSystems™
和Agilent的PCR仪器
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ROX
JUN
Texas Red
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SOLIScript 1-step Multiplex Probe Kit (Purple)
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08-61-00250
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Applied BioSystems™ PCR仪器(需含Mustang
Purple®通道)
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Cy5
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SOLIScript™ 1-step Multiplex Probe Kit(一步法多重PCR试剂盒-基于探针)可在同一个管子中高特异性的执行cDNA合成与基于探针的qPCR反应。更多优点如下:
1.**的特异性:独*改造的耐热型逆转录酶,cDNA合成高达60℃。
2.多重反应(高通量):一个反应可同时分析1-4个靶标。
3.反应体系配置,无需冰块:砖利的蛋白稳定技术,即使室温保存有效期高达30天。
4.无惧高GC含量PCR:独*优化的buffer配方。
5.预防交叉污染:内含dUTP,可匹配尿嘧啶糖苷酶(UNG)使用。
6.广泛的设备兼容性:如上
试剂盒组分:
1.5x One-step Multiplex Probe Mix:
HOT FIREPol® DNA聚合酶,反应缓冲液, dNTPs(含dUTP), 15 mM MgCl2 (终浓度为3 mM MgCl2)
2.40x One-step SOLIScript Mix:
SOLIScript逆转录酶, RiboGrip RNase Inhibitor(RNase强效结合蛋白,抑制RNA降解)
3.Water(无核酸酶)
可靠的实验结果展示:
对提取的人来源的总RNA进行5个浓度梯度的10倍稀释(每个反应:4000pg/ul - 0.4pg/ul),各浓度样品均使用Solis BioDyne的一步法多重PCR试剂盒,同时分析4个靶标。PCR仪器为:Applied BioSystems™ QuantStudio™ 6 cycler。
除了上述的优异的分子诊断研发神器,Solis BioDyne为客户提供终点PCR(end-point PCR),qPCR(real-time PCR),反转录PCR(Reverse transcription),以及其它PCR所需的配套试剂。产品线纵览图如下:
Solis BioDyne来源于欧盟-爱沙尼亚共和国,自1995年以来,Solis BioDyne一直致力于开发和生产高品质的生命科学试剂,现已成为当今欧洲领*的试剂供应商之一。高标准的生产标准和服务使Solis BioDyne成为全球值得信赖的首*PCR供应商。我们的DNA聚合酶,PCR Master Mixes,qPCR Mixes和其它试剂被全球110多个国家的研究者所使用,包括顶*研究机构和生物技术公司。
Solis BioDyne拥有独*的蛋白质稳定技术砖利,确保其PCR酶与PCR Mixes产品具有极高的稳定性,研究者可以常温运输以及常温下配置PCR反应体系(无需冰盒)。即使是室温放置30天,其酶活性也没有损耗。
作为Solis BioDyne在中国的区域总代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供*全*的Solis BioDyne产品以及订制服务。