慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免yi缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治*载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。
在细胞实验中,对于按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过使用病毒介导的方式能够大大提高基因的转导效率,达到目的基因高效表达的目的。
具体来说,慢病毒包装主要应用于以下几个方面:
1、对于难转染的细胞,如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,能大大提高目的基因转导效率,而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加,极大地方便了RNAi,cDNA克隆以及报告基因的研究;
2、进行稳转细胞株的筛选;
3、为活体动物模型实验提供高质量的包含目的基因的病毒液;
为产生高滴度的病毒颗粒,通常需要利用慢病毒表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装。慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息,慢病毒包装质粒可提供所有的转录、包装、重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中。离心收集上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞后,在细胞浆中被其自身携带的逆转录酶逆转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
慢病毒包装实验方法
构建含有目的基因的慢病毒表达载体(GeneCopoeia可提供各种慢病毒载体的ORF、启动子、shRNA、miRNA前体和miRNA抑制剂克隆)
慢病毒包装及检测工具:
1.慢病毒包装工具细胞293Ta(货号:LT008); 2.慢病毒包装试剂盒(货号:LT001); 3.慢病毒浓缩试剂盒(货号:LT007)
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