目前市面上常用的蛋白浓度检测方法是BCA蛋白浓度测定试剂盒和Bradford法蛋白质定量试剂盒。Bradford法相对传统方法而言,更简单、稳定,以及兼容性更好。
Bradford法蛋白定量:在一定的浓度范围内,蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
BCA蛋白定bai量和 Bradford法蛋白定量的区别:
1、Bradford法测得du的主要是碱性氨基酸和芳zhi香族氨基酸,daoBCA则没有选择性
2、BCA法蛋白浓度定量是二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(biuret reaction),一价铜离子和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
Bradford法蛋白定量是染料与蛋白质结合后引起染料*大吸收的改变,从465nm变为595nm,光吸收增加。蛋白质染料复合物具有高的消光系数,因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度,*低检出量为1μg蛋白。染料与蛋白质的结合是很迅速的过程,大约需2min,结合物的颜色在1h内是稳定的。一些阳离子,如K+,Na+,Mg2+,(NH 4 ) 2 SO 4,乙醇等物质不干扰测定,而大量的去污剂如TritonX100,SDS等严重干扰测定,少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。由于染色法简单迅速,干扰物质少,灵敏度高,现已广泛应用于蛋白质含量的测定。
Abbkine的Bradford法蛋白质定量试剂盒#KTD3002 提供了一种简单快速的方法,来测定样品中的蛋白质浓度
Bradford法蛋白质定量试剂盒特点:
1.节省时间—显色反应迅速
2.兼容性好—不受大多数化学物质的影响。对于样品中巯基乙醇和二硫苏糖醇的兼容浓度,分别可达1mM和5mM。
3.良好的检测范围—检测范围为50 - 1000ug/ml。
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