线粒体是存在于所有真核细胞中的独特的膜结合细胞器,作为ATP生产和细胞能量供应的主要场所,线粒体的独特方面(包括称为mDNA的单独遗传物质,其自身的蛋白质合成机制以及严格调节的膜电位梯度)使其成为重要的研究课题,另外,随着衰老过程和更多其他人类疾丨病方面的研究发现,线粒体的作用比以往更加值得我们研究。
这期主要给大家带来线粒体荧光探针(活细胞和固定细胞),线粒体膜电位探针,ATP检测,线粒体自噬检测,线粒体通透性转换孔(MPTP)检测相关工具。
一.细胞线粒体染料
1. 用于标记活细胞线粒体的可用MitoLite™染料
线粒体蓝色荧光染料MitoLite Blue FX490,货号:AAT-22674
2. CytoFix™红色固定线粒体染色
CytoFix™Red线粒体染色剂增强的细胞维持能力可使线粒体局部荧光得到保持,即使固定过程中线粒体膜电位丧失后也可以保留。该染料产生的荧光信号在溶酶体中得到很好的保留,使其便于长期跟踪线粒体。CytoFix™红色线粒体染色剂可与GFP表达的细胞,其他荧光偶联物和其他细胞器染色剂一起使用,进行多色分析。它既可用于悬浮细胞,也可用于贴壁细胞,并易于适应各种荧光平台。
CytoFix™红色线粒体染色的特征:
线粒体染色效率高
固定后可长期保留
操作时间短,标记步骤简便
在96孔黑边框透明底板上用CytoFix™MitoRed染色的HeLa细胞的荧光图像。
CytoFix™Red—适用于固定细胞线粒体染色
CytoFix™红色线粒体染色,货号:AAT-23200
二.线粒体膜电位:
电子传输链产生的线粒体膜电位(ΔΨm)是健康的线粒体功能所必需的关键参数。与质子梯度一起,它产生了线粒体ATP合成背后的驱动力。它通过选择性消除功能异常的线粒体在线粒体稳态中发挥关键作用,并且是线粒体钙稳态的重要组成部分。
凋亡早期的显着特征是正常线粒体功能的破坏, 线粒体膜的破坏和氧化还原电位可能会引起细胞活力的不必要损失,并成为导致各种疾丨病的原因。我们提供各种各样的荧光探针,用于分析活细胞中正常线���体活性的各个方面,包括活性氧(ROS)产生,线粒体膜电位和钙通量。
1. JC-10™双发射膜电位(ΔΨm)探针
JC-10™是JC-1的衍生物,是电位依赖性探针,用于通过流式细胞仪,荧光显微镜和基于微孔板的荧光测定法确定ΔΨm。在健康细胞中,JC-10™选择性地聚集在线粒体中,生成橙色的JC聚集体,该聚集体在590 nm处显示出较宽的激发光谱和zui大发射。然而,在具有低ΔΨm的凋亡和坏死细胞中,JC-10™从线粒体中扩散出来,并生成JC-10™单体,导致向绿色发射(525 nm)处转移。JC-10™允许以定性和定量方式来可视化ΔΨm的变化,分别考虑从橙色到绿色的荧光发射和荧光强度比的变化。它已成功用作多种样本类型的ΔΨm指示剂,包括肌细胞,神经元等。
JC-10™的特点:
易于使用:稀释到水性缓冲液中时,JC-10™不会沉淀,从而消除了伪影。
坚固:JC-10™由于在水性介质中的溶解度提高和灵敏度更高,因此测定偏差较小。
增强的信号:JC-10™具有比JC-1高的信噪比。
增强的灵敏度:在所有测试的细胞系中,JC-10™能够比JC-1更好地检测到ΔΨm损失的细微变化。
广泛的应用:JC-10™可用于原代大鼠肝细胞检测
方便:JC-10™与荧光酶标仪,细胞成像仪和流式细胞仪兼容。
用JC-10™(货号22204)和JC-1(货号22200)在Jurkat细胞中测定了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。将Jurkat细胞用喜树碱(10 µM)处理4小时后,将JC-1和JC-10™染料加载溶液添加到孔中,并孵育30分钟。使用NOVOstar酶标仪(BMG Labtech)在Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm下测量了JC-1和JC-10™的J聚集体和单体形式的荧光强度。
JC-10™和JC-1双发射线粒体膜电位探针
线粒体膜电位荧光探针JC-10,卓丨越的JC-1替代物,货号:AAT-22204
2. 线粒体选择性罗丹明酯
细胞渗透性阳离子罗丹明,例如TMRE和TMRM,很容易被活性线粒体隔离,通常用于标记活细胞中的线粒体。像JC-10™一样,线粒体中TMRE和TMRM的吸收是由线粒体膜电位驱动的。两种染料都已成功用于动态和原位定量检测,用于筛选线粒体通透性转换孔的抑制剂,评估活细胞中线粒体的功能,并可用于区分活的和死的细胞群,这些电位染料表现出zui小的自发淬灭性,低细胞毒性和合理的光稳定性,它们的荧光强度可以用流式细胞仪或荧光显微镜进行测量。与TMRM相比,TMRE的疏水性略强。
用于测量线粒体膜电位的电位染料
线粒体选择性罗丹明酯,货号:AAT-22220
三.ATP测定:
三磷酸腺苷(ATP)是一种复杂的有机分子,参与细胞的能量生成,代谢调节和细胞信号传导。它作为主要能源存在于所有活生物体中,并在没有活生物体的情况下迅速降解。因此,ATP测定是一种有用的工具,可用于各种研究应用程序中,以鉴定活生物体的存在。常见的应用包括细胞活力和细胞毒性,表面细丨菌的检测,水中细丨菌的定量,培养中的体细胞以及食品质量和污染测试。
我们的PhosphoWorks™发光ATP分析提供了一种快速,简单且均一的生物发光方法,可用于通过ATP检测确定哺乳动物细胞的细胞活力,细胞毒性和增殖。
用于测量ATP活性,以及生成或消耗:
PhosphoWorksTM荧光ATP检测试剂盒,货号:AAT-21620
http://www.amyjet.com/featured/mptp.shtml