关于核酸检测,方法还是挺多的,比如常用的分光光度法,和荧光染料法。
一、分光光度法
此法不具有选择性,无法区分DNA、RNA或蛋白质。检测数值J易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)和碱基组成差异的影响。
二、荧光染料法
也是今天要重点介绍的,有哪些荧光染料,可以特异地与双链DNA、单链DNA、RNA相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光,并且不会检测到样本中可能存在的其他杂质分子,荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应呢?
一起来看看吧:
首先,是 DNA和RNA定量试剂
Helixyte Green dsDNA定量试剂(17597)和StrandBrite Green RNA定量试剂(17611)分别对双链DNA和单链RNA进行了优化。它们对核酸有很高的亲和力,对结合核酸有J大的荧光增强作用,使得在几分钟内直接检测复杂溶液中微量核酸成为可能,而且一般不会受到其他生物分子的干扰。
小牛胸腺DNA中使用Helixyte 绿色和PicoGreen进行DNA定量。由图看出Helixyte 绿色和PicoGreen 具有几乎相同的性能。
Helixyte Green是一种出色的核酸定量试剂,与dsDNA结合后可显著增强荧光。其优势如下:
高灵敏度:Helixyte Green和StrandBrite Green的灵敏度比UV吸收率测定法高10,000倍
选择性高:与紫外吸收的测量不同,这些检测不受蛋白质,游离核苷酸或非常短的寡核苷酸的影响,从而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在复杂混合物(例如血清或全血)中更加准确。
操作简单:这些检测方法非常简单,不需要分离步骤,因此非常适合自动化,高通量筛选
检范围广:对于Helixyte Green的检测,定量在四个数量级内都是准确的。基于StrandBrite 的荧光检测在三个数量级上都是准确的。
1、dsDNA定量
Hoechst 33258,超级纯,#AAT-17520
Hoechst染料是一类在显微观察中标记DNA的荧光染料。因为这类荧光染料能标记DNA,所以它们也经常用于细胞核和线粒体的显像观察。这类染料中两个相关的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342经常使用。这两种染料都在紫外光下350nm处被激发,都在461nm处zui大发射光附近发射蓝/青色荧光。Hoechst染料可以用于活细胞或者固定化细胞,并且经常用来代替其它核酸染料如DAPI。这两种染料关键的不同点在于,与DAPI相比,Hoechst 33342加有乙基,这使它具有更强的亲脂性,因此能更好的透过完整的细胞膜。在一些实验中,Hoechst 33258的渗透性明显比Hoechst 33342要弱些。这些染料也可以用来检测样品中的DNA含量,通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线。
2.RNA定量
StrandBrite 绿色RNA定量试剂,200X DMSO 溶液,#AAT-17610
检测和定量小量RNA在各种分子生物学应用中尤其重要,比如定量体外RNA转录及测量RNA浓度在准备进行Northern印记杂交,S1p核酸酶分析,RNA酶保护分析,cDNA文库制备,逆转录PCR及DD-PCR。zui常用的是测定核酸浓度技术,在260nm处测定吸光度。基于吸光度的方法主要的缺点是来自蛋白、游离核苷酸及其他紫外线吸收化合物的干扰。利用灵敏的带荧光的核酸染色剂可减轻这种干扰状况。StrandBrite RNA定量试剂是一种可在溶液中对RNA进行定量检测的超灵敏的荧光核酸染色剂。StrandBriteRNA定量试剂可检测出浓度低至 5 ng/mL的RNA通过荧光酶标仪或荧光光度计。
关于核酸定量,以及荧光探针今天就介绍到这里啦,下期见哦
http://www.amyjet.com/featured/nucleic-acid-quantification.shtml