Comet Assay Kits 彗星分析试剂盒是什么,有什么作用,一起来分析一下吧!
首先来看看*常用和高通量筛选这两种:
1.Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)(zui常用),规格15 assays(5片/25片/5*25片)
2.Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)(高通量筛选),规格(1片/5片)
*为方便客户使用试剂盒,艾美捷科技善意将其翻译成中文操作手册,请以试剂盒中配套的英文版为准。因编者翻译水平有限,对于由本说明书中不当翻译所造成的损失,概不负责,如有错误,欢迎指正!
实验开始前,建议先通读说明书(主要以试剂盒中配套的英文版为准):
背景:由于环境因素和细胞内正常的新陈代谢过程,DNA损伤每天以每个细胞1000到100万个分子损伤的速度发生。虽然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小部分,但关键基因的未修复损伤可能会阻碍细胞发挥其功能的能力,并显著增加癌症的可能性。彗星实验(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳实验(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术。在电泳场下,损伤的细胞DNA(包含碎片和链断裂)从完整的DNA中分离出来,在显微镜下形成典型的“彗星尾巴”形状。DNA损伤的程度通常是通过测量彗星尾巴来目测的,也可以使用图像分析软件来测量各种参数。
OxiSelect™ Comet Assay是一种快速、灵敏的,用于测量细胞DNA损伤的试剂盒。每个试剂盒提供足够的试剂,zui多可进行15次检测。
实验原理:Cell Biolabs 的 OxiSelect™ Comet Assay 是一种单细胞凝胶电泳法 (SCGE),用于简单评估细胞 DNA 损伤。首先,将单个细胞与低熔点琼脂混合后,再应用到OxiSelect™ Comet特制玻片上。然后,用裂解缓冲液和碱性溶液处理这些嵌入的细胞,使DNA松弛并变性。zui后,在电泳槽中对进行电泳,以分离完整的DNA和受损的片段。电泳后,样品**燥,用DNA染料染色,并通过外显荧光显微镜可视化。在这些条件下,受损的DNA(包含裂解和链断裂)将比完整的DNA迁移更多,并产生 "彗星尾 "形状(见下图)。
彗星实验原理与流程示意图
自备材料:
1.氯化钠粉末
2.NaOH颗粒
3.10 N NaOH,用于调整pH值 (10 N NaOH = 10 M NaOH =10 mol/L NaOH)
4.DMSO(可选)
5.70%乙醇
6.TE缓冲液(10mM Tris,pH 7.5,1mM EDTA)。
7.PBS(不含Mg2+和Ca2+)。
8.EDTA(二钠盐)
9.DI H2O(去离子水)
10.37ºC和沸水浴
11.水平电泳槽
12.可调节的单通道微量移液器,带一次性吸头。
13.带FITC过滤器的外显荧光显微镜
保存条件:收到试剂盒后,将绿色荧光DNA染料,10000X存放在-20ºC。 所有其他试剂盒组件在室温下储存。
关于实验步骤,因为篇幅有限,大家感兴趣的可以搜一下原文,也可以留言哦~
文章来源:
https://www.amyjet.com/featured/comet-assay-kits.shtml
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