很多研究表明,5hmC 表达水平与基因表达调控、多能干细胞分化、神经元发育、以及肿瘤发生都密切相关。
人TET蛋白家族包含TET1、TET2和TET3这3个成员,所有TET蛋白都包含一个保守的双链β-螺旋结构域、一个富含半胱氨酸区和C端的核心催化结构域。而研究表明,基因组5hmC 水平与 TET 羟化酶活性相关。
那么如何检测5hmc羟化酶TET的活性呢?不妨来看下Nature同款方案:
以5mC-羟化酶TET活性/抑制分析试剂盒【5mC-Hydroxylase TET Activity/Inhibition Assay Kit】为例分析说明,该试剂盒有比色法(#P-3086)和荧光法(#P-3087)两种。
实验原理:甲基化底物被稳定地包埋在微孔板上。活性 TETs (客户提供)与底物结合,并将甲基化底物转化为羟甲基化产物。Tet- 转化的羟甲基化产物可以被特异性抗体识别。羟甲基化产物的比例或数量与酶的活性成正比,然后可以通过读取波长为450nm的吸光度或者荧光强度来对比分析。TET 酶的活性与测得的光强度成正比。
适用样本:TET酶的细胞核提取物;纯化的TET酶(TETs, 1-3)
性能展示:
好了,就介绍到这里啦,有兴趣的小伙伴们评论区留言哈
文章来源:Nature同款,5羟甲基胞嘧啶(5hmC)羟化酶 TET活性分析
https://www.amyjet.com/featured/5hmc.shtml