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氨基酸分析仪法与HPLC法比较

近年来常见常用的检测氨基酸的液相方法不少，主要介绍以下几种常用的方法与氨基酸分析仪法进行比较：

（一） OPA 法（邻苯二甲醛）（反应机理略）

*大的不足之处是：做全分析时需配以其他技术一起使用，方可与带有仲氨基团的氨基酸进行反应。赖氨酸及胱氨酸衍生物荧光较弱，灵敏度低。因为 OPA 是快速反应剂，有些氨基酸反应极其不稳定，特别是甘氨酸、赖氨酸衍生物的信号衰减很快，**变化很大。从以往我们做的实验来看此方法的变异系数 CV% 一般为5％左右，个别的氨基酸如组氨酸可达 9% 左右，尤其对带有盐分的料氨基酸类样品特别不适合，因样品中带有的盐分直接影响衍生（紫外法基线不好）。

（二） PITC 法（异硫氰酸苯脂）

此方法的重现性明显低于茚三酮法， *大的缺点是：一个组分衍生后可生成2个以上的衍生物，而且和其它组分峰重叠，灵敏度比较低。由于有残留的衍生剂，柱效与柱寿命降低很快（做 200 左右样品），变异系数在 4% ，也偏大，个别氨基酸如组氨酸可达 8% ，某些氨基酸在24小时内即降解。

（三） D-CL 法（丹酰氯）

反应比较简单以5个mol/L 比例，在室温、避光条件下几时分钟即可完成反应。

缺点不足之处是：衍生物对紫外比较敏感，反应必需要在避光下进行，赖氨酸、组氨酸和胱氨酸均生成二级衍生物影响准确测量。

（四） 2、4-二硝基氟苯法

此方法是比较常见的液相测定方法， *大的缺点是衍生剂峰比较大，对柱子危害比较厉害。组氨酸分离不好、组氨酸的二级衍生物与丝氨酸重叠，另一个峰柱效降低时完全溶入到前面苯丙峰中，直接影响定量，日间变化比较大。

氨基酸分析仪与 HPLCHPLC常规比较

氨基酸全自动分析仪		常规高效液相色谱仪HPLC
蛋白质水解物	30min	50 min
生理体液	110 min	135 min
分离	95%-98%	85%
检测限度	3poml	100poml
定量**度	CV≦1%	CV≦3%
操作	简单	复杂

《氨基酸分析仪法与HPLC法比较》来源：上海交大分析测试中心侯敬丽

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