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酶标仪通道差与孔间差检测问题剖析
酶标仪通道差与孔间差检测问题剖析,具体内容如下所示:
一、酶标仪通道差检测:取一只酶标板(酶标板是通过
洗板机
来清洗的,一般是辅助
全自动酶标仪
使用实现蛋白含量测定的
医疗器械
)小孔杯(杯底须光滑、透明、无划痕、无污染)以酶标板架作载体,分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置,蒸馏水调零,采用双波长(测定波长490nm,参比波长630或650nm,以下均相同)连续测三次,观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。 jjymafwh
为了提高酶标仪的检测速度,根据 96孔酶标板的规格特点,目前大多数厂家的中、**酶标仪均采用8通道的检测器(部分中、低档酶标仪目前仍采用单通道)。因而它们每个通道的检测能力是不尽相同的,它是仪器内部的固有误差,与所测溶液浓度成正相关(不同检测器对不同浓度溶液的响应能力不同),所以通道差是衡量酶标仪性能良好与否的重要指标之一;其衡量指标用极差表示,这与厂家推荐的指标是一致的;极差值越接近于零,通道差越小,说明同一样品于不同通道检测结果的一致性越好。
二、酶标仪孔间差的测量:选择同一厂家、同一批号酶标板条(8条共96 孔)分别加入200 ul甲基橙溶液(吸光度调至0.065~ 0.070 A)先后置于同一通道,蒸馏水调零,采用双波长检测,其误差大小用±1.96s衡量。
由于不同厂家、不同批号酶标板之间的质量差异,导致孔与孔之间的检测结果也不完全一致,这与水平光路光度计的比色皿质量是否符合要求一样,因此我们认为孔间差是酶标仪外部的固有误差,只有准确测知孔间差,并对结果作出相应的校正,才能使检验结果更符合实际情况、更准确可靠;采用的评价指标(士1.96 s)也是有利于结果校正的。另外,在设计孔间差测量的操作方法上,我们将200 ul甲基橙溶液吸光度调至 0.065~0.070 A,是充分考虑到加样器的误差,其目的是使加样误差控制在酶标仪的分辨率(0.01 A)以下,这样也就避免了孔间差结果不因加样误差而导致假性增高。
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