DyLightTM 488
DyLight 488标记的抗体比Cy2 和FITC标记的更亮,与Alexa Fluor 488 标记的亮度相当,但背景较低(见图5、6)。
图5. HEp-2细胞使用ANA(BIO-RAD)一抗标记,并比较使用不同发色团的二抗标记.荧光显微镜下,上排图片的细胞用ProLong Gold (Invitrogen)封片,下排细胞用含N-没食子酸丙酯(抗淬灭剂)的PBS-90%甘油封片。NikonLABOPHOTNikon 荧光显微镜连接D-70 DSLR 摄像机,100×曝光1秒拍摄的图片。
图6.使用FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson),分析抗-CD3和其他荧光素标记的人外周血**细胞图谱。DyLight488 (l绿色)、FITC(黄色)、Cy2(蓝色)标记的二抗都来自JIR公司。另外Alexa Fluor488购自Molecular Probes, Inc.。箭头所指处显示Alexa Fluor 488在这个实验中有轻微的背景。比FITC和Cy2的褪色少,更耐光。任何抗褪色试剂不增加它的耐光性是实验中需求绿色荧光的选择。
如图7所示,可以看到不含抗淬灭剂的封片中DyLight 488标记光淬灭明显少于FITC、Cy2标记。由此说明,DyLight 488自身在荧光显微镜中具很强的耐光性。同时,图8显示即使加抗淬灭剂也不会增加其光稳定性。
图7.以时间为横坐标,初始荧光强度的百分比为纵坐标绘制的图谱,HEp-2细胞以ANA(Bio-Rad)和各种山羊抗人IgG(H+L)的二抗标记,细胞用不含抗淬灭剂的PBS-90%甘油封片。 | 图8.以时间为横坐标,初始荧光强度的百分比为纵坐标绘制的图谱,HEp-2细胞以ANA(Bio-Rad)和DyLight488山羊抗人IgG(H+L)的二抗标记,细胞用各种封片剂封片。 |
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