SMARTpool ®技术

SMARTpool ^®技术

   在自然状态下，RNAi通常是由于病毒的入侵、移动转座子或者其它的错误转录的内源基因序列所得到的长的双链RNA（dsRNA）启动的。dsRNA会被体内的Dicer逐步切割成为21-23b长度的双链siRNAs，siRNAs进而和RISC结合。通过这种机理所产生的大量的siRNAs分子将是非常高效的基因沉默分子，提供给细胞以*基本的**机制从而抵御病毒的侵略、控制内源转座子的移动和监测内源基因的转录。

     早期通过使用传统设计的siRNAs混合物进行实验模拟自然情况下的siRNA的基因沉默，大部分均以失败告终（见下图）。由于低功能性或者无功能性siRNA和有功能性siRNA与RISC的竞争性结合，导致观测到的靶基因的表达下降水平非常有限。

Figure. Pooling SMARTselection™ Designed siRNAs can enhance the potency of gene silencing. With conventionallydesigned siRNAs, which can vary widely in their ability to suppress gene expression, pooling frequently leads to a dilution of thesilencing ability of the best duplex. [Compare individual, conventionally designed siRNAs with conventional pools (P)]. However,when using SMARTselection™-Designed siRNAs, pooling typically maintains or increases the probability of successful mRNA knockdown (C = control, non-targeting siRNA.)

通过这种传统设计方法得到的siRNAs混合产品，其沉默靶基因的能力有限，显然成为基因沉默的一大障碍。但是，Dharmacon的研究人员发现，给细胞转染由4条理性设计法则得到的siRNAs（SMARTpool试剂）将会产生高效的基因沉默效果（见上图）。Dharmacon倡导的理性设计参数，是建立在大量siRNA分子的结构和序列特异性参数基础上的，是一种极端**的工具，成为SMARTselectionTM和SMARTpool®技术的核心。这是某前商业化产品中普遍认为*好的技术，可使得设计合成的siRNA试剂始终如一的提供给业内*值得信任和高效的基因沉默试剂—保证沉默效果至少75％，但大部分的沉默效果为95％。

      基因沉默的效率依赖于siRNA理性设计参数的强有力支撑：一款强大的参数将设计出高效的siRNAs混合试剂，混合试剂中的每一条siRNA同样具有高效的沉默能力。Dharmacon这种强大参数主要体现在SMARTselection^TM和SMARTpool^® 技术中，这两者是Dharmacon所有产品的基础。
    SMARTselection^TM设计参数被用来筛选对靶基因具有高效沉默效应的siRNA序列，SMARTpool^®试剂由4条单独的SMARTselectionTM技术设计的siRNA组成，每条siRNA均靶向同一基因mRNA的不同位点，将它们混合在一起作为一个试剂使用，同时提供每条siRNA的序列信息。

     SMARTpool^® siRNAs试剂靶向同一mRNA的多个位点，对于初期的基因沉默研究非常有用，其升级产品为分开的4条单独siRNA产品并提供序列信息，可用于更为深入的科学研究。

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