检测原理

葡萄糖来源的AGEs （Glc-AGEs）ELISA试剂盒利用的是基于“三明治”原理的固相酶联**吸附试验（ELISA）。如右图所示，96孔板的表面有一层单克隆抗体涂层可直接识别样品中Glc-AGEs的特异性抗原位点，然后使用HRP标记的anti-AGE抗体结合Glc-AGEs形成“三明治”复合物，*后酶显色对样品进行定性和定量研究。

检测对象

人或其他动物的纯化蛋白、血浆、血清和细胞裂解液。

试剂盒成分

(1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

(2) Glucose-derived AGEs standard, 250 uL×2

(3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

(4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60uL×1 (mouse monoclonal antibody)

(5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.

(6) Substrate solution, 30 mL×1

(7) Stop solution, 15 mL×1

(8) Wash buffer concentrate (×20) , 30 mL×1

(9)Dilution plate, 1 plate

工

作

液

配

制

清  洗  液

使用前确保washbuffer浓缩液内无结晶颗粒，往30 ml的浓缩液内加入570 ml去离子水即为工作液，此溶液可以保存在2-8℃*多放14天。

抗体稀释液

用10倍体积的清洗液稀释"Reference standard and sample diluent"即可。

标准溶液

用等体积"Referencestandard and sample diluent" 稀释"Glucose-derived AGEs standard"（500ng/ml），如下图所示，依次配成250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml的溶液。

HRP标记-AGEs

抗体（100×）

用5 ml 的抗体稀释溶液稀释50ul 的HRP-anti AGEs antibody浓缩液，稀释后的抗体不能保存。

显  色  液

在使用前加1片OPD tablet到13 ml 底物溶液即可，此溶液需现配现用。

待测样品的准备

用"Reference standard and sample diluent"稀释样品，若样品浓度非常高，需用PBS进行预稀释，*后再调整浓度至100×或更高。

1

96孔板准备

加入300 ul的清洗液至每个孔内，温育30 min；完全倒掉孔内溶液后，再加入300ul 清洗液。再重复此步2次。

2

一抗反应

按50 ul/孔的量加入标准溶液、稀释样品孵育1 hour，可以做两个平行。孵育完成后吸去反应液，用300 ul清洗液清洗3次。

3

二抗反应

加50 ul/孔的100倍稀释的HRP- anti AGEs antibody，孵育1 hour。孵育完成后吸去反应液，用300 ul清洗液清洗3次。

4

显      色

加100 ul/孔显色液，孵育10min；

5

终止反应

加100ul/孔终止液终止酶显色反应；

6

读取吸光度

酶标仪在490nm下读取吸光值；

7

计算结果

使用标准曲线计算出AGEs的浓度，使用4-ParameterLogistic Model分析数据。

产     品     名     称

货  号

特异性

规  格

应  用

价格（￥）

Glucose-derived AGEs ElISA kit

KG452

All animal species

96tests

ELISA

8316.00