helica黄曲霉**M1检测试剂盒 Quantitative Aflatoxin M1 Detection Elisa Kit

helica黄曲霉**M1检测试剂盒 Quantitative Aflatoxin M1 Detection Elisa Kit

1．概述

本产品是一敏感的用于定量检测黄曲霉**M₁的**学检测方法。适用于牛奶和一些乳制品中黄曲霉**M₁的检测。如果有必要可以利用HPLC, GC/MS方法加以证实。

2. **性说明

试剂盒含有少量的黄曲霉**M₁；底物中含有四甲基联苯胺；终止液中含有稀硫酸，避免皮肤和粘膜接触终止液；以上各溶剂不小心滴到皮肤上请用水冲洗。

3. 存储和稳定性

存储：4–8℃

在使用前试剂盒的温度要恢复到室温(20-25℃)。

试剂在有效期内都可以使用。

4．原理

此试剂盒是通过AFM1抗体来检测AFM1的。将标准品或样品加入到微孔中和包被在微孔底部的抗AFM1的高亲和力抗体发生反应。如果样品中存在 AFM1，它将和包被的抗体结合，此过程孵育30分钟，洗板。然后加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的**，酶标记**与标准品或者样品与抗体没有结合的部位相结合。孵育60分钟，倒出孔里的液体，清洗后加入显色底物作用20分钟，在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合的酶结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中AFM1的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的AFM1浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD_450nm 读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。

5. 操作数据

敏感性：黄曲霉**M1的检测限1 pg/mL，检测结果越靠近曲线的中间越准确。

重复性：标准的变异系数小于 10%；样品的变异系数小于<15%。

特异性：和黄曲霉**(B1,B2,G1,G2)无交叉反应

回收率：

6 ．试剂盒组成

1. 真空包装微孔板（12×8条）包被有黄曲霉**M1多KL抗体。

2. 黄曲霉**M1标准液：（6）0，15，25，50，100，250pg/ml（ppt），每种1ml。

3. 1 瓶12ml  HRP酶标记的黄曲霉**M1结合物。

4. 1 瓶14 mL 底物显色液。

5. 1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩)，即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水

6. 1 瓶 6 mL 终止液.

7. 英文操作说明书

7. 操作步骤

1. 在对应的微孔中加入100 μL 标准或样品。*好做重复。

2. 在室温下孵育30分。

3. 将孔里的液体倒入合适的容器中，每个微孔至少加入250μL、1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。

4. 使用排枪在每个孔中加入 100 μL 酶结合物。

5. 在室温孵育60分。

6. 将孔里的液体倒入合适的容器中，每个微孔至少加入250μL、 1×洗液，然后弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。

7. 每孔加入 100 μL底物显色液，在室温孵育20分。尽量使其不见光。

8. 每孔加入 50 μL终止液，板中颜色将会由蓝色变为棕黄色。

9  450nm 下读取每个孔的吸光度值（OD）。

8. 结果评估

可以利用商业ELISA软件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 来评价ELISA结果。也可以通过计算每个标准的%B/B0值，以%B/B0为y轴、黄曲霉**M1浓度为x轴作一标准曲线。样品浓度可以通过标准曲线来 计算。当样品的浓度小于标准1 (15 pg/mL or ppt)时报道称浓度小于15ppt，当浓度大于250ppt时要稀释后再测定。

半定量结果的判定，可根据样品的吸光度值与标准的吸光度值来判定，样品的吸光度值低于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉**M1含量大于此标准的浓度，样品的吸光度值高于某个标准的吸光度值，则说明样品的黄曲霉**M1含量小于此标准的浓度。

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