FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit,Fluorescent-TdT Enzyme

背景介绍：

细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着重要的作用。细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中，并发生形态学和生理生化的特征性改变，比如细胞皱缩，细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA降解成为约180bp-200bp 的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结构仍保持完整，*终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。

检测原理：

在凋亡晚期细胞中，DNA 会被降解为不同大小的片段，正常的或正在增殖的细胞则几乎没有DNA 的断裂，该方法是将荧光素（Fluorescein）标记和未标记的dNTP 在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT 酶）的作用下，连接到凋亡细胞中断裂DNA 片段的3’-OH 末端，然后进行荧光显微镜或流式细胞仪检测。试剂盒对标记反应进行了优化，采用*佳比例的荧光素标记和未标记的dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入，使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的“标记尾巴”，该“标记尾巴”减少了相邻掺入dNTP上标记基团的空间位阻，增加每个断裂片段后的荧光基团数目，降低荧光基团相邻后可能造成的聚集和淬灭，从而提高检测灵敏度，减少非特异性反应。此外试剂盒提供的封片剂中含有DAPI 核染料，可以将全部标记和未标记细胞的DNA 着色，并在330-380nm波长激发光下发出荧光，从而得以判断凋亡细胞占总细胞比例。封片剂还可以稳定和增强荧光信号，减少淬灭，从而提高检测的灵敏度。

检测次数：50 次

检测方法：荧光显微镜或流式细胞仪

样本类型：石蜡包埋组织切片、组织冰冻切片、细胞涂片以及细胞悬液

种属反应：一系列不同种属

储存与运输条件：试剂盒需用干冰运输并储存在-20℃非无霜冰箱中

订购信息：Merck公司产品

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