仪器介绍
转棒仪本质上是一种简单的设备,设计来转动水平旋转杆。该测试的商业化导致了一种更复杂的设备的逐步演变。该设备以电子方式运行,并且可以很容易地编程,以提供更为定制的数据收集方法,甚至可以提供**、质量可靠、符合GLP的数据记录,以满足**开发中的法规遵从性。使用该设备的较新版本,旋转杆可以在预先编程的时间段内以任意数量的不同速度运行,从而可以在同一试验中完成分步测试。同样地,该装置可以被编程为在不同的时间长度内以不同的加速度加速,并且甚至可以在需要时反向运行横杆。因此,有许多选项来修改测试方案,以适应实验的具体要求。然而,就大多数实验目的而言,定速和加速版本被广泛使用,可以认为是广泛的实验模型领域的标准,可以满足大多数实验室的需求。
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仪器主要包括一个旋转杆,驱动电机和齿轮传动系统。旋转杆的长度和直径取决于要测试的啮齿动物种类。以小鼠为例,转棒仪器的尺寸:旋转杆直径约为3 cm,商业设备中的杆通常由有机玻璃或其他硬质塑料制成,旋转杆表面沿纵轴形成一系列平行的水平凹槽,使小鼠能够有效地抓住它。凹槽的深度是一个至关重要的细节,如果小鼠不能实现良好的抓握力,测试将会非常困难;另一方面,如果抓握力太好了,小鼠会被动地抓住杆跟随其旋转。旋转杆通常支撑在仪器底座上方30 ~50 cm,如果设置的高度太低,容易导致动物不进行任务,而倾向于从杆上跳下来。在仪器的底部放置一个柔软的软垫,给跌落下来的小鼠作为缓冲。正常情况下,这种仪器坠落并不会对动物造成任何伤害。可以根据需要设计测试容量,商业设备通常包括多个通道(一般设置6个通道),可以并行测试相应数量的动物。有些商业设备设计为每个通道可以独立开始实验。通道由塑料隔板或者法兰(圆形的部件)隔开,法兰的直径为20~30 cm。通道的宽度约为6 cm,但如果未成年小鼠倾向于在杆上转身,可能需要调整得更小。一般商业设备的转速范围为0-100 rpm/min(一般实验设计速度范围为4~40 rpm),精度为0.1 rpm/min。实验时间可分段, 每段可以设置不同的时间、速度、加速度,可灵活设置匀加速、匀减速实验。
设备包括定时装置,它在电机打开时会自动启动,每个通道下铺设有红外旋转杆,旋转杆中断时,代表动物跌落,计时停止,用于测量从旋转杆上跌落的潜伏期。潜伏期数据传输到计算机上,并记录动物落棒的原因(例如跌落、跳跃)。仪器也可以自动统计每组的均值、标准差,方便查看结果。大鼠的关键设备参数可设置为:旋转杆直径7~8 cm,距离地面50 cm,通道宽10cm。
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图1:大鼠转棒仪装置的正视图和侧视图。所有尺寸均为厘米。
实验动物的选择
转棒疲劳仪适用于啮齿类动物,更通常用于评估小鼠的运动能力。越来越多的研究人员正在使用转基因(Tg)小鼠**模型作为探测**过程的生化,细胞和行为方面的工具,并筛选新的**方法。因此,对Tg模型的背景品系的选择对于对这些动物的**状态进行准确的多因素评估至关重要。为了确定运动测试中表现的品系差异,以评估它们在预期运动参数发生变化的**中作为基因修饰小鼠的背景品系的适用性,并确定小鼠表现是否随时间以品系特异性方式变化(这可能成为长期重复测试研究的混杂变量),有研究使用了六种近交小鼠品系进行测试,使用的品系包括129S2 / SvHsd,BALB / cOlaHsd,C3H / HeHNsd,C57BL / 6J,CBA / CaOlaHsd,DBA / 2OlaHsd。结果表明,在旨在量化小鼠运动协调性的行为任务中存在相当大的品系差异,而且,品系特定的表现变化可以随着重复测试而变化。DBA/2在定速旋转任务上的表现明显差于使用的其他小鼠品系的表现,并且有点令人惊讶的是,表现的损害发生在相对较低的速度(7~23 rpm)下,而不是在更高的速度下。
有趣的是,CBA/Ca的表现随时间变化*明显,在第8周表现似乎比其他几周更具弹性。定速旋转任务比更常用的加速旋转任务对小鼠的运动变化更敏感,后者未能确定品系或重复试验的显着主要影响。另外,与以往研究一致,C57BL / 6J和CBA / Ca小鼠品系在加速旋转任务上表现良好,而DBA小鼠表现不佳,这表明加速旋转是评估运动协调的可靠方法。特别令人感兴趣的是发现,随着重复测试,表现存在品系特定的变化。使用的6种小鼠品系中有5种的表现随着时间的推移保持稳定。然而,DBA / 2小鼠了解到从杆上掉下来会产生有益的后果(返回饲养笼),因此没有动力留在设备上。这种行为适应导致了这种特定小鼠品系的较大误差,并导致整体的显着影响。我们建议,如果要将Tg小鼠用于行为测试,则必须非常小心地选择维持Tg小鼠系的潜在背景品系。129S2/Sv品系和DBA/2品系作为纯品系不适合进行行为测试,这是因为前者品系的冷漠性质和后者的性能可变性。
也有研究者研究了一些近交系,以确定转棒测试的任务表现和运动学习是否存在遗传变异。在改进的加速版本的转棒模型中,小鼠每天接受三次试验,持续三天,并记录每天的转棒表现。测试了雄性和雌性129S1/SvlmJ、A/J、BALB/cByJ、C3H/HeJ、C57BL/6J、CBA/J、DBA/2J和FVB/NJ小鼠。在运动表现方面观察到了品系和性别差异。一些品系通常表现更好(如C57BL/6J和CBA/J),而其他品系表现较差(如A/J)。129S1/SvImJ与其他亚系相比为中等表现,其中129S6/SvEvTac表现*好,129P1/ReJ表现*差。不同品系的运动学习能力也有所不同,因为一些品系在三天内表现出任务表现提高,而其他品系则没有,如DBA/2J、A/J在连续训练中没有表现出运动技能的学习能力。
这些研究综合表明,背景品系的选择是转基因小鼠**模型中运动缺陷重复行为评估的关键考虑因素。
实验程序
转棒测试通过评估动物保持在旋转杆上的能力,比较对照组与**模型/干预组啮齿动物的运动表现。转棒任务可以使用多个版本的方案,主要是转速、加速度和测试时间等参数有所不同。
1.实验材料:
1)适当的小鼠品系和饲养环境。
2)70%乙醇喷雾和吸水性纸巾用于清洁仪器。
3)转棒疲劳仪。
2.设备运行准备:
1)设置旋转杆的速度,在现代商业仪器上,这是一个可编程的参数。
2)检测红外光束是否灵敏度正常。
3.训练动物:
动物应适应实验设备,以尽量减少可能导致它们无意中从杆上掉下来的焦虑和探索行为。
1)对于运动协调能力的测试,不需要采集训练时的数据。
2)先设置一个较慢的转棒速度,通常为4 rpm,将小鼠放置在旋转杆上,这样运行1 min。对于正常小鼠,将杆的速度提高到10 rpm,运行2 min,当在这个速度下成功时,进一步增加速度到30 rpm,并让小鼠再保持3 min。在这一阶段完成后,根据使用的小鼠品系,应该给予小鼠15分钟的休息或允许继续训练。附带条件是,如果训练过程中它们从杆上掉下来,应该将其放回到它们的饲养笼里进行15分钟的恢复。
3)完成上述训练后,允许小鼠继续训练标准的转棒测试的试验。将它们放置在仪器上,并允许它们按照测试程序进行试验(见下文),直到它们达到稳定的表现水平。
4)对于加速版本转棒实验,小鼠放置在旋转杆上,杆加速到预设的终点,通常初始速度为 4 rpm,加速度为 20 rpm/min,直到达到*大速度40 rpm。对于固定速度的方案,应该训练小鼠在每个速度下达到*佳表现。
5)在训练结束后,至少等待24小时再进行正式试验。
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