1. 如果动物不动或行动得很慢,有很多可能的原因和解决方法。对于奖赏交替,首先检查饲养笼里是否有未吃完的食物,也许是因为它们吃得太多了,导致试验时动机不足,但*可能的原因是适应不到位。在适应步骤时,要确保所有动物能够立即锁定放在饲养笼里的食物,之后,在其他逐渐接近测试场景的装置中重复这一步骤,或者在迷宫地板上放置一层薄薄的饲养笼的垫料,以减少焦虑。睡觉或不合作的动物,通常可以通过在饲养笼里给予少量奖赏来“启动”它们,从而诱导它们行动。拿一个装满牛奶的注射器,给每只小鼠挤出几滴,它们会从注射器的末端舔舔它。对于大鼠,放一些奖赏食丸。当然,如果主要实验(而不是预训练)正在进行,则必须对对照组和实验组给予同等的激励手段。此外,实验者可能特别感兴趣的是感觉运动或动机过程是否受到了处理因素的影响,在这种情况下,“补救措施”显然是不合适的。
2. 还可能出现的问题是在一系列试验中,动物的速度越来越慢,在某个时刻,它们就停止探索迷宫了。通常,一次测试(session)包括10次试验(1个采样试验加9个测试试验),*多可以重复进行3次。超过3次重复测试,就会有越来越多的小鼠开始超过时间限制,通常无法恢复,并且不得不被排除在实验之外。在实验设计时,*好设计不超过3次测试。如果需要4次或更多的实验,应考虑更大的样本量,以弥补实验对象的潜在损失(可以相对于期望的终样本量增加40-50%)。然而,在某些情况下,一些动物也可能在前三次测试就表现出高潜伏期。在这种情况下,听觉或触觉刺激可以用来促进动物沿着迷宫运动。需要强调的是,如果选择了这一解决方式,就必须采用一个好的标准,所有组的所有动物都必须使用相同的标准进行测试。若动物不动,建议的标准是:在80 s 时,使用声音刺激(从动物身体中心上方约30厘米处打响指3次,不要从左侧或右侧发出声音,否则会产生空间偏倚);100 s时,用长棉签的棉端轻轻抚摸动物的背部中心三次,在120、140和160 s时,重复如上所述的触觉刺激。如果动物在听觉和触觉刺激下仍超过了时间限制,将其放回笼子,至少30 min后再次测试。必须谨慎地进行充分的刺激,避免给动物带来压力。触觉刺激应该只是非常轻地触摸动物的皮毛,不要以任何方式刺、推或伤害它。听觉刺激也应该是一种柔和的声音而不应过分刺耳。一些研究人员不喜欢使用额外的听觉或触觉线索。有三种选择,一是不使用听觉/触觉刺激;二是只用于那些超时的动物;三是默认应用于所有动物。我们的建议是,只有在十分必要的时候才采用额外的刺激,即在大量超时的实验中,只在超时的动物上应用。无论选择这三种选择的哪一个,都必须在所有实验中保持不变。
3. 动物放入迷宫中起始臂远端,背向目标臂,但试验开始后动物并不转身。这表明动物可能生病、嗜睡或很老了。轻轻地手动帮助动物转身。如果它开始沿着起始臂移动,就让它自由地探索迷宫。如果动物保持静止,轻轻地手动引导它沿着起始臂和两个目标臂中的一个移动。重复这个过程*多三次,直到动物自发地转身并沿着迷宫移动。如果动物可以自发探索了,那么就开始测试。如果三次以后动物仍然静止不动,就把它从迷宫中拿出来放回笼子里,几个小时后重新测试。
4. T迷宫有许多与其他开放迷宫或高架迷宫相同的问题,即对迷宫或实验者的恐惧,以及它探索和寻找迷宫中食物的动机水平。当动物对迷宫或实验者的应激恐惧超过其对探索和觅食的动机时,动物对迷宫的探索减少,甚至一直呆在迷宫某处不动。这种恐惧通常表现为在迷宫中排便和排尿。当它被拿起时也会尖叫。因此,足够的适应是必要的,动物的动机水平可能也需要得到解决。否则,如果动物没有在迷宫中做出选择,就无从得知它的记忆能力是正常的还是受损的。
5. 如果在试验中没有提供**数量的奖赏,动物可能会遭受“对比效应”。这指的是,如果收到的奖赏低于预期,那么动机就会降低。曾有研究者在试验后期没有了足够的炼乳,所以稀释的比例超过了建议的1:1,结果导致小鼠在后面的试验都没有离开迷宫的起始臂。然而,如果动物一直被习惯于奖赏数量在一定范围内的可变性,它们的表现就不太会受到影响。
6. 对照组动物表现出强烈的单侧偏好。如果健康的大/小鼠表现出强烈的转向左或者右的倾向,那么可能是这一侧有吸引力,或者,另一侧可能有厌恶因素。例如,如果对雄性小鼠进行测试,在迷宫左侧臂放一个装有雌性小鼠的开放笼子,可以观察到一种强烈的向左转向的倾向。另一方面,如果迷宫上的照明不均匀,一侧臂比另一侧更亮,那这一侧对大/小鼠来说是厌恶的,因此总是会避免进入明亮的臂。
7. 若动物会舔迷宫,而不是去探索,那么需要检查是否使用了一种带有水果香味的洗涤溶液来清洗迷宫。如果有,用水湿的纸巾将溶液从迷宫中去除,然后用30%乙醇浸泡的纸巾消除任何残留的气味。
8. 大/小鼠倾向于跳出迷宫的这种情况并不常见,但它可能发生在一些幼年动物或接受基因突变、药理学操作和导致过度活跃的大脑损毁的动物中。可以用透明挡板覆盖迷宫,或者,增加迷宫侧壁的高度,50厘米应该足以防止跳跃逃脱。
9. 运动受损的动物沿着起始臂缓慢移动,到达目标臂时超过了时间限制。解决方法可以是改变一下起始位置。在每次试验开始时,将动物放置在起始臂的中心位置,而不要放在远端,就在选择区之前。所有实验组,包括对照组,都必须使用相同的起始位置。
10. 对照组动物表现出随机水平的交替,这在健康的成年大/小鼠中并不常见。确保在测试期间,实验室内没有听觉、视觉或嗅觉的干扰。确认饲养条件是否有规律,是否没有压力。确保测试前**或测试当天饲养笼没有改变(实验前不要换垫料),确保在前几天动物没有经历压力操作(如麻醉),手术后至少恢复5天再进行行为测试。
11. 若大/小鼠在迷宫中会排出大量的尿液和粪便,这是动物焦虑的迹象。房间里的什么东西可能会影响了这些动物。尽量保证实验室处在昏暗的光线条件下,而不是在标准照明下,因为啮齿动物天生恐光,明亮的光线会产生焦虑。还要确认没有可以吓到动物的噪音。
12. 若大/小鼠后腿直立,嗅探空气,而不沿着迷宫移动,那么需要检查实验室里的嗅觉刺激是否分散了动物的注意力(例如,如果之前进行过采血,但没有清理干净),确认后消除嗅觉干扰。
13. 动物跑得太快了,要人工及时记录下所有的结果是很困难的,尤其是选择潜伏期。*好是使用自动记录系统,比如VisuTrack动物行为分析系统(上海欣软)。
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