小鼠新物体识别实验（Novel Object Recognition, NOR）流程与避坑指南

一、实验原理

新物体识别实验基于啮齿类动物对新颖物体的天然探索偏好，通过检测小鼠对新旧物体的探索时间差异，评估其空间记忆与认知能力。该实验成本低、操作简单，广泛应用于神经科学、药wu筛选及行为学研究。

二、实验流程

1. 实验准备

实验箱：透明塑料或玻璃箱（推荐尺寸：40×40×40 cm），底部铺垫干净垫料，保持环境安静、光线柔和（约200 lux）。

实验物体：选择无气味、非毒性材质（如塑料、金属）的物体，形状差异明显（如立方体、圆柱体），避免小鼠因材质偏好影响结果。实验分组对照组（正常小鼠）与实验组（如药wu处理组），每组≥10只，随机分配。

2. 训练阶段（Habituation）

适应环境将小鼠放入空实验箱，自由探索10分钟，消除环境应激。物体预暴露移除小鼠后，在箱内放置两个相同物体（A、A’），小鼠返回后继续探索10分钟，确保其对物体无恐惧。

3. 测试阶段（Testing）

替换新旧物体：移除一个旧物体（A），替换为新物体（B），保持位置随机（避免空间偏差）。

记录探索时间：通过视频跟踪软件（如EthoVision）或人工记录，统计小鼠探索新旧物体的时间（鼻尖接触物体≥1秒计为有效探索）。

测试时长：通常为5-10分钟，时间过长可能导致小鼠疲劳。

4. 数据分析

辨别指数（DI）计算公式：DI = (新物体时间 - 旧物体时间) / (新物体时间 + 旧物体时间) ×100%。

判断标准DI≥0表示偏好新物体（正常认知），DI<0或无显著差异提示认知障碍。

三、避坑指南

1. 实验设计阶段

样本量不足

每组至少10只小鼠，个体差异可能导致结果偏差。物体选择不当避免使用带孔洞、可移动的物体（可能引发啃咬或恐惧），确保新旧物体材质、重量一致。环境干扰实验期间保持安静，避免震动或噪音；实验箱需彻底清洁（75%酒精擦拭），防止气味残留干扰。

2. 训练与测试阶段

适应时间不足跳过训练阶段直接测试会导致小鼠焦虑，探索时间缩短。位置偏好干扰固定物体位置可能让小鼠因探索习惯而非记忆产生偏差，建议每次测试随机更换物体位置。测试时长过长超过10分钟易导致小鼠疲劳，探索行为减少。

3. 数据分析阶段

• 忽略个体差异

• 需剔除探索时间总和＜10秒的小鼠（可能因病或应激）。

• 未重复实验

• 至少重复3次独立实验，避免偶然性误差。

• 数据正态性检验

• 若数据不符合正态分布，改用非参数检验（如Mann-Whitney U检验）。

四、常见问题与解决方案

问题1：小鼠不探索物体

→ 检查物体清洁度、气味；增加适应时间或更换更醒目的物体（如反光材质）。

问题2：DI值波动大
→ 确保实验条件一致（如光照、温度）；增加样本量。

问题3：药wu干预后DI未变化
→ 确认药wu剂量与给药时间合理；延长测试间隔观察长期效应。

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