脂质体大规模制备方法

 脂质体已实现工业化生产，其制备方法也有多种技术，如超临界逆相蒸发法（SCRPE）、冷冻干燥、加热方法、喷雾干燥和其他几种改进的乙醇注入技术受到越来越多的关注。

◆  1. 加热方法

该方法利用磷脂与含有甘油（3%）水溶液的水合作用，根据胆固醇是否存在，将温度升高至60℃或120℃。甘油具有等渗作用，能够防止沉淀和凝结，增加了脂质体囊泡的稳定性。此外，由于其水溶性和生理学特点，甘油是可接受的化学物质。这是较好的方法，因为脂质不会降解。

该制备方法一旦使用了高温（120℃），就不需要灭菌。最近，该方法已被改进，被称为Mozafari方法，用于食品级抗微生物乳链菌肽的包封和靶向递送。该改进方法可用于大规模单步制备脂质体，且无须预先对成分材料进行水化，还避免了使用有毒去污剂和有机溶剂。

◆ 2. 冷冻干燥

基于脂质体在水溶性载体材料中形成脂质均匀分散体，冷冻干燥的方法可用于制备无菌和无热原的亚微米小尺寸脂质体。将脂质体形成的脂质和水溶性载体材料，如蔗糖，以适当的比例溶解在叔丁醇/水共溶剂系统中形成透明的各向同性单相溶液，然后将单相溶液过滤灭菌并装入冷冻干燥小瓶中，通过冷冻干燥过程形成固体脂质体制剂。

加入水后，冻干产物自发形成均匀的脂质体制剂。

在研究与该方法相关的各种参数后，发现脂质/载体之比是影响脂质体制剂的尺寸大小和多分散性的关键因素。因此，使用叔丁醇/水共溶剂体系来降低制备成本。

◆ 3. 超临界流体法

超临界流体是指临界点区域的物质。这些气体性质独特，表现得像液体和溶剂，可以像气体一样输送物质，这些特性使他们成为有毒有机溶剂的最佳替代品。

现在被广泛应用于提升制备技术、降低粒径，并且还用于纯化。二氧化碳是最广泛使用的超临界流体之一。它无毒、不易燃、廉价、无腐蚀性、环保且易于获取关键参数（73.8bar和31.1℃）。通过将条件恢复到大气压力，因此容易回收。使用超临界流体法来减小脂质体的大小和灭菌是一种简便的方法。

脂质体的灭菌剂和制备所有过程通过一步即可完成。

◆ 4. 超临界流体逆相蒸发法

将压缩气体、有机助溶剂和脂质放入温度高于脂质转变温度的搅拌反应釜中，然后缓缓注入水相。当释放压缩气体降低压力时，形成脂质体。

SCRPE方法系利用减压方法的原理来制备脂质体。该方法很好，但药物包封率低。

最近，通过避免使用有毒有机溶剂，进一步改进了该方法，称为改良的超临界流体逆相蒸发技术。这项新技术还提高了载药效率和脂质体的稳定性。

◆ 5. 微射流法

微射流的方法基于微乳化，并且可用于大规模生产脂质体。在微射流设备中，脂质可以大型多层脂质体的分散体形式加入，或作为未水化脂质分散在有机介质，如磷酸盐缓冲液或挥发性溶剂中。

收集的流体可以在整个处理器中再循环，直到获得球形脂质体。

微射流设备用狭窄的孔口以非常高的压力泵输送流体。然后，它沿着确定的微通道，引导两股流体在高速下以直角碰撞，从而影响能量的有效传递。

微射流法的过程是可重复的，可制备包封水溶性的脂质体。

◆ 6. 膜过滤挤出法

最近，在使用膜挤出器（PhD脂质体挤出器）的情况下应用乙醇注入技术用于大规模脂质体生产。

在该方法中，将脂质相（乙醇、磷脂和胆固醇）挤压经过具有特定孔径的膜。压力低于5bar的氮气足以使有机相通过膜。同时，水相切向膜表面并移除膜装置内形成的脂质体。

新的技术优势是设计简单，调整工艺参数可控制脂质体大小，以及增强大规模生产的能力。

◆ 7. 挤出法

挤出法用于生产具有明确大小的单层脂质体。

当多层脂质体在压力下被迫通过狭窄孔隙的过滤器时，会发生膜破裂和释放，并且造成被包封的物质渗漏。因此，挤出过程应在含有最终负载浓度的介质下进行。在脂质体形成完成后再去除外部溶质。

水化脂质体囊泡反复通过冻融程序循环，然后在升高的温度下，强制通过孔径逐渐降低的双层堆叠的聚碳酸酯膜（顺序依次为200nm，100nm和50nm）。为了获得所需大小的囊泡，每个双层膜挤压5~10次。

近年来通过表面孔片上挤出微米大小的囊泡和特殊长度的脂管已有报道。

◆ 8. 高压均质法

高压均质机由于具有破坏囊泡的能力，所以适用于制备脂质分散体和脂质体。在恒定高压下，将样品注入均质机的特殊设计部分。湍流、剪切或空化作用导致脂质体的形成。

施加的压力和循环次数决定了通过高压均质机制备的脂质体的性质。

高压均质法使得制备的脂质体的尺寸非常小，因此，它适用于制备静脉注射用脂质体。

◆ 9. 电形成法

在该方法中，将磷脂膜沉积在电极上，随后在电场作用下，水化几个小时。尽管通过施加交流电和直流电能形成巨大的单层脂质体，但直流电场有一定的不足，由于水电解而发生起泡。电形成法制备出的脂质体80%是较完善的单层脂质体。