protein drug and vaccine delivery. 

蜘蛛小壶腹腺丝（spidroins）因其出色的生物相容性，可以产生多达七种不同类型的蜘蛛红素，

每个都有独特的属性和功能。蜘蛛小壶腹腺丝（MiSp）可能对生物医学应用特别有趣，因为
成分丝具有机械强度，在水中不会过度收缩，归因于其氨基酸组成。在这项研究中，我们评估了其潜力
来源于Araneus ventricosus MiSp的重组纳米粒子作为蛋白质递送载体。

基于MiSp的纳米粒子能够作为有效的交付系统，在装载模型时实现了近100%的效率
蛋白质溶菌酶，并在生理学上显示出缓释特性pH值。这些纳米颗粒可以显著提高
模型蛋白通过不同的给药途径。此外，皮下注射后负载模型蛋白抗原溶菌酶的纳米粒子
或肌肉注射可以增强抗原特异性免疫通过涉及抗原库的机制在小鼠模型中的反应
注射部位的影响、长期抗原持久性和有效摄取通过树突细胞以及淋巴结内化。 

Construction of recombinant plasmid and protein expression 

The correct plasmid (pET-NM) was transformed into E. coli BL21 (DE3) competent cells. For protein expression, the E. coli cells were grown at 37 °C in LB medium containing 100 μg/mL ampicillin until OD600 is around 0.8–1.0. Then 1 mM Isopropyl β-D-Thiogalactoside (IPTG , final concentration) was added to the culture for protein expression at 25°C for 12 h. For protein purification, the cells were harvested by centrifugation and lysed using High Pressure Homogenizer (PhD Technology LLC, USA). In order to obtain pure NM IBs, the insoluble pellets were resuspended in 30 ml of washing buffer (20 mM Tris, 300 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% Triton X-100, 1 M urea, pH 8.0) and extensively washed for three times. Finally, the inclusion bodies were washed with 20 mM Tris pH 8.0 to remove contaminating detergent and the purified inclusion bodies (NM-IBs) were used for subsequent solubilization study.

重组质粒的构建及蛋白表达
将正确的质粒（pET-NM）转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中。对于蛋白质表达，大肠杆菌细胞在37°C下在含有100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中生长，直到OD600约为0.8-1.0。然后将1 mM异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG，终浓度）加入培养物中，在25°C下表达蛋白质12小时。为了纯化蛋白质，通过离心收集细胞，并使用高压均质机（美国PhD Technology LLC）裂解细胞。为了获得纯NM-IBs，将不溶性沉淀物重新悬浮在30ml洗涤缓冲液（20mM Tris、300mM NaCl、1mM EDTA、1%Triton X-100、1M尿素，pH 8.0）中，并广泛洗涤三次。最后，用20mM Tris pH 8.0洗涤包涵体以去除污染的洗涤剂，纯化的包涵体（NM IB）用于随后的增溶研究。