1. 大脑与神经元
人类大脑由大约100亿个神经元组成,神经元之间通过突触相互连接成复杂的功能网络,因而大脑是人体*复杂的器官。目前,人们对大脑的功能机制的认知还停留在较低的水平,研究大脑的功能也成为科学家的**目标。2013年1月,人脑工程成为欧盟“未来新兴旗舰技术项目”之一,未来10年内将获得10亿欧元的科研经费。随后,奥巴马宣布将从2014 财年的政府预算中拿出1亿美元,启���“人脑活动图”项目研究(Brain Activity Map project)。这两大脑科学研究计划势必将掀起神经科学研究的热潮。
神经元,又称神经原或神经细胞,是构成神经系统结构和行使功能的基本单位。神经元是具有长突起的细胞,它由细胞体(Soma)和细胞突起-轴突(Axon)和树突(dendrite)构成。
神经元与神经元之间会发生频繁的信号传递与交互,从而构成非常复杂的神经网络。神经元之间的信号传递依赖于细胞膜上的离子通道(Ion channel)。离子通道的开闭会引起膜内外离子的交换,如Na+/K+离子,从而引起膜电位的变化。所以说神经元的信号传递会伴随着电活动,当达到一定阈值时,便可引发动作电位(Action potential)。检测神经元动作电位的发生变成为研究神经活动的主要方法,比如传统的膜片钳技术。
2. 在体多通道记录技术(in-vivo multichannel recording)
传统的膜片钳技术是一种离体的记录方法(in-vitro),主要是针对离体培养的细胞和脑片进行记录,而且大多是单通道记录,一次只能记录一个细胞,通量不高。随后发展出了MEA技术,即Multi-Electrode Array,利用多电极阵列对细胞或脑片进行记录,这样就变成了多通道记录,解决了通量的问题。
然而,离体状态下的记录与动物的本来状态还是相去甚远,尤其是研究动物在某种活动状态下的神经活动更加是不能实现。所以在体或活体状态的多通道记录便是迫切需要。
在体多通道记录(in-vivo multichannel recording)是在活体状态下研究动物神经活动的一种方法。将电极阵列植入动物的大脑某皮层或区域,电极后续接入高灵敏度的放大器及记录系统,将记录到的模拟信号转换成数字信号,在配套的记录软件上变可以观察到放电信号。现在国际上已经有非常成熟的用于在体多通道记录的系统和产品,比如美国Neuralynx公司研发的DitgialLynx系统,其高速的采样率和A/D转换率、超低的噪音、*高可达512通道、超大的记录范围、简便易用的软件等方面,给研究者在神经科学研究方面带来极大的帮助!
3. 在体多通道记录的实验流程
在体多通道记录主要包括动物手术、电极植入、信号记录采集及数据分析等步骤。
(1)动物手术:
以大小鼠为例,将实验动物麻醉,常用****钠或水合氯醛静脉注射的方法,有条件也可使用气体麻醉。去除动物头顶处的毛,将动物固定在脑立体定位仪上,然后将头皮剪开,将组织清理干净,露出头骨,可以比较清晰的看见骨缝。利用骨缝进行定位,确定电极植入的位置。
用颅骨钻在颅骨开天窗,一般方形的窗比较常用。小心取下骨片,再在天窗对侧脑区打下几个螺钉孔,用来固定颅骨螺钉,一般打2至4个。用1ml注射器针头小心去除硬脑膜,尽量避免出血。
(2)电极植入:
先固定颅骨螺钉,使得螺钉接触到脑组织,但又不过分压迫。用电极夹持器夹住电极,先定位在天窗上方,将电极的地线缠绕在颅骨螺钉上。讲电极**紧挨脑组织表面。然后,用微推进器缓慢向下推进(建议使用高精度的电动微推进器),使得电极进入脑组织。注意推进的速度,使电极缓慢到达想要记录的脑区。
(3)信号记录:
连接好记录系统,包括headstage,主机,电脑等。打开记录软件,观察放电信号。Neuralynx的DitgialLynx系统配备Cheetah采集软件,可以同时显示高频Spike信号及低频信号,如LFP/EEG/EMG,记录原始的未滤波信号,可在软件设置input range、filter、thresholds等参数,操作简单方便,界面友好。 待观察到稳定且信噪比较高的信号,便可开始记录。在记录同时还可以同时接入其他外源事件和刺激,如电刺激、光刺激。
除了麻醉状态下记录,还可以让动物清醒状态下进行记录。这样便可结合动物行为学,让动物完成各种任务并同时进行记录。
(4)信号分析:
记录好数据之后,便可进行数据分析。Neuralynx提供SpikeSort3D进行Spike Sorting。Spike Sort 3D是一款用于Spike波形在线和离线的分类工具。它集成在Cheetah DAS 软件中,同时也可以作为独立的程序。在2D和3D界面中,使用者可以轻松的手动定义不同的放电聚类,清晰明了。Spike Sort 3D提供主成分分析PCA,并有多个特征值features可选,并提供Cluster quality measures-isolation distance和L-ratio。
Sorting之后,Neuralynx还提供NeuroExplorer进行数据分析软件。NeuroExplorer现在已经是第四代版本,可以提供*完整的一套Spike分析方法。研究者可以从多个角度分析连续的信号数据和神经元的数量。强大的内置的脚本语言,让许多分析工作的自动化,同时其开放式的分析环境,您可以使用其他程序来扩展其功能。
NeuroExplorer可以读取多种文件格式,包括许多流行的数据采集系统,文本文件,Excel电子表格和MATLAB创建的数据文件。为了帮助出示您的分析结果,NeuroExplorer创建完全可编辑,达到出版质量的表格和图表。