BTX电转仪---- 领导CRISPR实验

什么是CRISPR?

CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）, 是**中用于与病毒进行斗争的**武器。 生命进化历史上，**为了将病毒的外来入侵基因**，进化出CRISPR系统，利用这个系统，**可以不动声色地把病毒基因从自己的染色体上切除，这是**特有的**系统。这种切除功能其中比较典型的模式是依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列（图1），并招募一个蛋白（如Cas9）（图2）,Cas9能够将该序列进行切除（图3）。正是基于**的这种后天**防御机制，CRISPR/Cas9技术应运而生，从而使科学家们利用RNA引导Cas9核酸酶实现对多种细胞基因组的特定位点（如 NHEJ非同源性末端接合) (图四4)进行修饰。

为什么要电转？
CRISPR**已经开始，将CRISPR结构导入特定细胞 (如干细胞、神经细胞、造血细胞、受精卵,等等)用普通地方法旺旺很困难。电穿孔技术可使这些细胞在**的电脉冲作用下，在细胞膜上形成瞬时的空隙，从而诱导CRISPR结构通过这些空隙进入细胞中。在电脉冲撤离后，细胞恢复原有状态，这种物理学的方式并不影响细胞内部任何代谢及生理变化。

卵母细胞电极:

可用于高通量小鼠卵母细胞、受精卵或者胚胎的CRISPR/Cas9基因编辑
易于使用，快速，高通量
每次可以操作20 – 40 个卵母细胞
电转过程可视
容易收集电转后所有的胚胎细胞

使用BTX电转仪将 CRISPR/Cas9 质粒转染进难转染的细胞例如Taxoplasma gondii

 A) 在Taxoplasma gondii 细胞中，CRISPR 质粒 (pU6-SAG1)切断SAG1 位点

B) 成功转染的细胞 (绿色) 与 模拟（mock） 转染细胞比较

来源: Efficient Genome Engineering of Toxoplasma gondii using CRISPR/Cas9 Sidik SM, et al., 2014Plos One, volume 9, Issue 6, July 2014