1. 用PDQuest软件或肉眼比对,找出感兴趣的蛋白点,并做好标记和记录。
2. 用MilliQ水冲洗胶2次。
3. 用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗Ep管
4. 将枪头(200l)下端剪去,使其内径略小于蛋白斑点的直径,用色谱纯甲醇和MilliQ水冲洗枪头。
5. 对准斑点中央小心将蛋白切割下来,放入Ep管,MilliQ水漂洗2次,如胶块太大,将其切成1 x 1 mm的胶片。
6. 将切好的点做好标记和记录,置-80oC保存或冻干后-20oC存放。
注意事项:
1. 尽量避免皮肤和头发的角蛋白的污染,在操作过程中应戴一次性的PE手套(不用乳胶手套)和帽子。
2. 不要将胶长期存放于乙酸溶液中。
3. Ep管及染胶的容器必须用甲醇和水充分清洗,尤其应与进行Western blotting的容器分开,以避免casein或BSA的污染。