活体动物体内成像技术是指应用影像学方法,对活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究的技术。小动物活体成像是近年来在生物医**面非常活跃和前沿的领域,在研究细胞行为,**活性和代谢,**的进展等方向取得了**性的进步。分为生物发光成像(以Caliper和Xengon仪器为代表)和荧光成像(以KODAK和CRI仪器为代表)。
Junchenght提供近红外的荧光成像染料及其与小分子**和生物大分子的荧光标记服务,并提供生物发光底物虫荧光素(D-luciferin)和腔肠素(coelentarizine)。
荧光成像的推荐步骤:
1)SPF级 BALB/C裸鼠,6~8 周龄,18~20克,实验前24 h 自由进食、饮水。
2)于实验裸鼠腹腔内注射2%****钠300μL(215 mg/ kg)麻醉动物。将裸鼠俯卧位平放于小动物多光谱活体成像系统的记录暗箱中。实验时将Cy7或Cy7标记的生物分子或***好溶于水(或甲醇/乙醇/乙二醇,有时DMSO 200uL能把小鼠杀死)稀释后,于裸鼠尾静脉注射200μL(浓度0.5 mg/mL)[*佳用量和时间需要客户根据自己的仪器和**试剂等条件优化]。每5min 记录1 张动物在体内发射荧光的成像图片,分析荧光**的分布情况。对照鼠不注射**,进行同时记录。记录结束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、肾等脏器,进行成像。
3)Cy7 检测时激发波长700~770 nm带通,发射波长790 nm长通。液晶可调谐滤光片扫描范围 780~950 nm,扫描步进10 nm。曝光时间为500 ms。
不同的**代谢时间不一样,注射入裸鼠体内,荧光立即分布全身,然后逐步向膀胱聚集,呈现显著的肾排泄的特点一般4~6小时,快的只有30分钟;如果是骨骼和鼻腔等部位靶点的Cy7标记**,有客户反映一周后活体成像系统仍能检测到荧光成像。
器官切片观察:将解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4小时以上,0%,20%,30%PBS蔗糖依次沉底,20μm切片,多聚赖氨酸洗过的载玻片贴片,晾干,DAPI染色。共聚焦显微镜观察,激光器为氦氖 633 nm。
荧光试剂
目录号 产品名称
D1050 Cy3
D1051 Cy3, SE
D1053 Cy5
D1054 Cy5, SE
D1056 Cy5.5
D1057 Cy5.5, SE
D1058 Cy7
D1059 Cy7, SE
D1003 Alexa Fluor 488
D1023 Alexa Fluor 488琥珀酰亚胺酯
D1006 Alexa Fluor 555
D1028 Alexa Fluor 555琥珀酰亚胺酯
D1009 Alexa Fluor 647
D1031 Alexa Fluor 647琥珀酰亚胺酯
D1012 Alexa Fluor 680
D1015 Alexa Fluor 750
D1035 Alexa Fluor 680琥珀酰亚胺酯
D1037 Alexa Fluor 750琥珀酰亚胺酯
D22070 DiR碘化物
生物发光试剂
目录号 产品名称
D21150 腔肠素native
D21151 腔肠素cp
D21152 腔肠素f
D21153 腔肠素h
D21154 腔肠素hcp
D21155 腔肠素n
D13415 D-氨基虫荧光素
D12501 D-虫荧光素游离酸
D12505 D-虫荧光素钾盐
D12509 D-虫荧光素钠盐
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