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中文名称
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线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)
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英文名称
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Mitochondrial Membrane Potential Assay Kit with JC-1
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Cat #
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22202-100 次
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规格
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100 次
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贮存条件
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-20°C干燥避光保存
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保质期
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12个月
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状态
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现货
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线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)
产品组成：
产品简介：
线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)是一种以JC-1 为荧光探针，快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线
粒体膜电位变化的试剂盒，可以用于早期的细胞凋亡检测。
JC-1 是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织或纯化的线粒体
膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可以产生红色荧光;在线粒
体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1 为单体，可以产生绿色荧光。这样就可以
非常方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极
化的比例。
线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。通过JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以
很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可以用JC-1 从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的
一个检测指标。
JC-1 单体的*大激发波长为515nm，*大发射波长为529nm;JC-1 聚合物的*大激发波长为585nm，
*大发射波长为590nm。实际观察时，使用常规的观察红色荧光和绿色荧光的设置即可。
本试剂盒提供了CCCP 作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。
对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100 个样品;对于12 孔中的样品，本试剂盒共可以检测
200 个样品。
使用说明：
1. JC-1 染色工作液的配制
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量为1mL，其他培养器皿的JC-1 染色工作液的用量以此类推;对
于细胞悬���每50～100 万细胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取适量JC-1(200×)，按照每50μL JC-1(200
×)加入8mL 超纯水的比例稀释JC-1。剧烈震荡充分溶解并混匀JC-1。然后再加入2mL JC-1 染色缓冲液
(5×)，混匀后即为JC-1 染色工作液。
2. 阳性对照的设置
把试剂盒中提供的CCCP(10mM)推荐按照1∶1000 的比例加入到细胞培养液中，稀释至10μM，处
理细胞20 分钟。随后按照下述方法装载JC-1，进行线粒体膜电位的检测。对于大多数细胞，通常10μM CCCP
处理20 分钟后线粒体的膜电位会完全丧失，JC-1 染色后观察应呈绿色荧光;而正常的细胞经JC-1 染色后
应显示红色荧光。对于特定的细胞，CCCP 的作用浓度和作用时间可能有所不同，需自行参考相关文献资
料决定。
3. 对于悬浮细胞
(1) 取10～60 万细胞，重悬于0.5mL 细胞培养液中，细胞培养液中可以含血清和酚红。
(2) 加入0.5mL JC-1 染色工作液，颠倒数次混匀。细胞培养箱中37℃孵育20 分钟。
(3) 在孵育期间，按照每1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入4mL 蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 染色
缓冲液(1×)，并放置于冰浴。
(4) 37℃孵育结束后，600g 4℃离心3～4 分钟，沉淀细胞。弃上清，注意尽量不要吸除细胞。
(5) 用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤2 次：加入1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞，600g 4℃离心
3～4 分钟，沉淀细胞，弃上清。再加入1mL JC-1 染色缓冲液(1×)重悬细胞，600g 4℃离心3～
4 分钟，沉淀细胞，弃上清。
(6) 再用适量JC-1 染色缓冲液(1×)重悬后，用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光
分光光度计检测或流式细胞仪分析。
4. 对于贴壁细胞
注意：对于贴壁细胞，如果希望采用荧光分光光度计或流式细胞仪检测，可以先收集细胞，重悬后参
考悬浮细胞的检测方法。
(1) 对于六孔板的一个孔，吸除培养液，根据具体实验如有必要可以用PBS 或其它适当溶液洗涤细胞
一次，加入1mL 细胞培养液。细胞培养液中可以含有血清和酚红。
(2) 加入1mL JC-1 染色工作液，充分混匀。细胞培养箱中37℃孵育20 分钟。
(3) 在孵育期间，按照每1mL JC-1 染色缓冲液(5×)加入4mL 蒸馏水的比例，配制适量的JC-1 染色
缓冲液(1×)，并放置于冰浴。
(4) 37℃孵育结束后，吸除上清，用JC-1 染色缓冲液(1×)洗涤2 次。
(5) 加入2mL 细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
(6) 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5. 对于纯化的线粒体
(1) 把配制好的JC-1 染色工作液再用JC-1 染色缓冲液(1×)稀释5 倍。
(2) 0.9mL 5 倍稀释的JC-1 染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100μg 纯化的线粒体。
(3) 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描(time scan)，
激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm 时，
可以在475～520nm 范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6 中的波长设置进行荧光检
测。
(4) 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6. 荧光观测和结果分析
检测JC-1 单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm;检测JC-1 聚合物时，可以把激
发光设置为525nm，发射光设置为590nm。
注意：此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在*大激发波长和*大发射波长。如使用荧光显微
镜观察，检测JC-1 单体时可以参考观察其它绿色荧光时的设置，如观察GFP 或FITC 时的设置;检测JC-1
聚合物时可以参考观察其它红色荧光，如碘化丙啶或Cy3 时的设置。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，
并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
保存条件：
-20℃避光保存，尽量避免反复冻融，有效期一年。
超纯水和JC-1 染色缓冲液(5×)也可4℃保存。
注意事项：
1. JC-1(200×)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃
水浴温育片刻至全部融解后使用。
2. 必须先把JC-1(200×)用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，才可以加入JC-1染色缓冲液(5×)。
不可先配制JC-1染色缓冲液(1×)再加入JC-1(200×)，这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续
的检测。
3. 装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液(1×)洗涤时，使JC-1染色缓冲液(1×)保持4℃左右，此时的洗涤
效果较好。
4. JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
5. 请勿把JC-1染色缓冲液(5×)全部配制成JC-1染色缓冲液(1×)，本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1
染色缓冲液(5×)。
6. 如果发现JC-1染色缓冲液(5×)中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
7. CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，有毒，请注意小心防护。
8. 为了您的**和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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