|
质粒中量提取试剂盒II从50~100 mL **培养液中纯化400 μg高纯度质粒DNA
质粒中量提取试剂盒II试剂盒组分：
|
Catalog #
|
PD1412-02
|
|
Preps
|
25
|
|
ezBindTM Columns
|
25
|
|
Buffer A1
|
135 mL
|
|
Buffer B1
|
135 mL
|
|
Buffer C1
|
170 mL
|
|
Buffer KB
|
110 mL
|
|
RNase A (20 mg/mL)
|
13.5 mg(675 µL)
|
|
Elution Buffer
|
60 mL
|
|
User Manual
|
1
|
保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
2、转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、柱结合能力：450 μg
质粒中量提取试剂盒II操作简明步骤：
1、取100 µL新鲜的菌液接种到15-80 mL (勿超过 100 mL)的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入5 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入6 mL Buffer C1, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5、将离心管转至高速离心机，在室温下14,000 x g 离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
6、小心吸取离心后的上清液至50 mL管中（避免吸起沉淀），加入6 mL 100% 乙醇，立即摇匀，需马上离心过DNA柱。
7、立即转移6.0 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
8、可选: 向DNA柱中加入4.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
9、向离心柱中加入5.0 mL 70% 乙醇，室温下>2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
10、将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
11、将离心柱转至一个新的15 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL**ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置1分钟，>2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，将15 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间，>2,500 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
质粒中量提取试剂盒II操作流程：
|
