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- 产品名称：过滤法质粒大量提取试剂盒
- 产品型号：PD1512-02
- 产品展商：Biomiga
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- 发布时间：2018-08-08
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简单介绍
过滤法质粒大量提取试剂盒（Plasmid ezFilter Maxiprep Kit）在离心法质粒中量提取试剂盒基础上开发的快速过滤法提取试剂盒，采用特殊的过滤装置，直接过滤细胞裂解液，收集上清。可在45分钟内从100~250mL菌液中提取到高达1mg高拷贝质粒DNA。
产品描述
过滤法质粒大量提取试剂盒（Plasmid ezFilter Maxiprep Kit）可在45分钟内从100~250mL菌液中提取到高达1mg高拷贝质粒DNA。
过滤法质粒大量提取试剂盒组分：
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Catalog#
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PD1512-00
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PD1512-01
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PD1512-02
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Preps
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2
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10
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25
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ezBindTM Columns
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2
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10
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25
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Filter syringe
(60 mL)
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2
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10
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25
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Buffer A1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer B1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer C1
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27 mL
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135 mL
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330 mL
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RNase A
(20 mg/mL)
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2.2 mg
(110 µL)
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11 mg
(550 µL)
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27 mg
(1.35 µL)
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Elution Buffer
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6 mL
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30 mL
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60 mL
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User Manual
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1
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1
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Elution Buffer.
2、转化菌：若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、柱结合能力：1mg
过滤法质粒大量提取试剂盒操作简明步骤：
1、取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入12 mL Buffer C1, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5、将裂解液转移至过滤器中，放在一个50mL的试管上静置10分钟。管中的白色絮状沉淀浮上来，对准50mL的管向下压，使裂解液尽可能多的通过，有些裂解液可能会残留在沉淀中。注：静置10分钟时RNase A将工作，排除RNA污染。
6、加入12 mL 100% 乙醇，立即混匀，需马上离心过DNA柱。
7、立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
8、向离心柱中加入10mL 70%乙醇，室温下>2,500 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
9、将离心柱放回高速离心机中，室温下>2,500 x g 开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
10、将离心柱转至一个新的50 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL**ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置1分钟，5,000 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。若想提高得率，将50 mL离心管中的洗脱液再加到柱的中间，5,000 x g离心5分钟以洗脱质粒DNA。
过滤法质粒大量提取试剂盒操作流程：
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