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- 产品名称：无内**质粒小量提取试剂盒
- 产品型号：PD1212-02
- 产品展商：Biomiga
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- 发布时间：2018-07-08
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简单介绍
无内**质粒小量提取试剂盒(EndoFree plasmid mini kit)处理5-12mL的菌液，可获得30-70µg的质粒DNA。
产品描述
无内**质粒小量提取试剂盒(EndoFree plasmid mini kit)处理5-12mL的菌液，可获得30-70µg的质粒DNA。
无内**质粒小量提取试剂盒组分：
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Catalog #
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PD1212-02
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Preps
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250
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ezBind Columns
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250
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Buffer A1
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125 mL
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Buffer B1
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125 mL
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Buffer N3
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175 mL
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Buffer KB
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135 mL
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DNA Wash Buffer*
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54 mL
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EndoClean Buffer
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40 mL
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Endofree Eluiton Buffer
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30 mL
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RNase A(20 mg/mL)
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12.5 mg(625 µL)
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User Manual
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N3,相同体积的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer .
2、转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存的菌种进行培养。
无内**质粒小量提取试剂盒操作简明步骤：
1、接种新鲜的单个菌落到3-12 mL的LB培养基 (含适量***)，37oC震荡培养14-16小时。
2、室温下10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
3、加入450 µL Buffer A1 (确保已加入RNase A)，用移液器或涡流震荡确保菌体充分悬浮。
4、加入 450 µL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
5、加入100 µL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
6、将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟(若上清中仍有白色沉淀，可翻转后再次离心5分钟)。 7、定量吸取离心后的上清液至新的1.5mL管中，加入0.1 volume的EndoClean Buffer，混匀后冰浴10分钟，其间不时摇匀(若EndoClean Buffer粘稠难吸，可将枪头剪掉头后再吸取)。
8、室温下(冰浴取出后务必使溶液温度恢复到23oC以上，否则溶液不分层，为保证分层效果，可直接在65oC温育5分钟)13,000 rpm离心10分钟。此时溶液分为两层，上层水相含有质粒，下层红色有机相含有无内**。
9、将上层水相转移至一个新的2.0mL管中，加入450µL的Buffer N3及400µL的100% ethonal，用手用力甩3次以混匀。 10、将溶液700 µL转移至带有收集管的DNA柱中，室温下13,000 rpm 离心20秒，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步骤至全部溶液转移至DNA柱中。
11、可选: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室温下13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
12、向离心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer (确保已加入无水乙醇)，室温下，13,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“12”。
13、将离心柱放回高速离心机中，13,000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
14、将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 µL (体积>50 µL) 的Endofree Elution Buffer，洗脱质粒DNA。将离心管中的洗脱液再次加到DNA柱的正中间，室温放置1分钟，13,000 rpm 离心1分钟，收集洗脱液到同一个离心管中。
无内**质粒小量提取试剂盒操作流程：
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