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- 产品名称:无内**质粒中量提取试剂盒
- 产品型号:PD1415-02
- 产品展商:Biomiga
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- 发布时间:2018-08-29
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简单介绍
无内**质粒中量提取试剂盒(EndoFree plasmid midi kit)处理15-50mL的菌液,可获得100-200µg的质粒DNA。
产品描述
无内**质粒中量提取试剂盒(EndoFree plasmid midi kit)处理15-50mL的菌液,可获得100-200µg的质粒DNA。
无内**质粒中量提取试剂盒组分:
Catalog #
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PD1415-02
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Preps
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25
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EzBindTM Columns
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25
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Buffer A1
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70 mL
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Buffer B1
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70 mL
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Buffer N3
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100 mL
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Buffer KB
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85 mL
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EndoClean Buffer
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25 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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7 mg(350 μL)
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Endofree Eluiton Buffer
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50 mL
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User Manual
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1
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保存条件:
RNAse A在4℃下可以保存一年,Buffer A1加入RNase A 后4℃保存,其它组分室温保存。
注意事项:
1、质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时,使用2倍的菌液体积,2倍的Buffer A1,B1,N3,100%乙醇,相同体积的70% 乙醇和Endofree Elution Buffer.
2、转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌,请先涂布平板培养后,再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存在4oC的菌进行培养。
4、柱结合能力:250 μg
5、对富含内源核酸酶的宿主菌(endA+)如HB101, JM101, TG1等,需去核酸酶,请使用产品PD1712。
无内**质粒中量提取试剂盒操作简明步骤:
1、取50 µL新鲜的菌液接种到15-50 mL (勿超过 50 mL)的LB培养基(含适量***),37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟,收集菌体,并尽可能的吸去上清。
2、加入2.5 mL Buffer A1(确保已加入RNase A),用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入 2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀,然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入600 µL Buffer N3, 立即反转5次,用手用力摇晃3-5次充分混匀,此时出现白色絮状沉淀。
5、将离心管转至高速离心机,在室温下13,000 x g 离心10分钟(若上清中有白色沉淀,可再次离心)。
6、定量吸取离心后的上清液至新的15 mL管中(避免吸起沉淀),加入0.1 倍体积的EndoClean Buffer,混匀后冰浴10分钟,其间不时摇匀(若EndoClean Buffer粘稠难吸,可将枪头剪掉头后再吸取)。
7、室温下(冰浴取出后务必使溶液温度恢复到23oC以上,否则溶液不分层)13,000 x g离心10分钟(也可在2,500 x g离心15 分钟)。此时溶液分为两层,上层水相含有质粒,下层红色有机相含有内**。
8、将上层水相转移至一个新的15 mL管中,加入3 mL的Buffer N3及3 mL的100% ethonal,用手用力甩5次以混匀,该混合溶液需要需马上进行过柱吸附操作。
9、立即转移6.0 mL裂解液至带收集管的DNA柱中,室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。
10、可选: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室温下> 2,500 x g 离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。
11、向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇,室温下> 2,500 x g离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“11”。
12、将离心柱放回高速离心机中,室温下> 2,500 x g开盖离心10分钟,以彻底去除残留的乙醇。
13、将离心柱转至一个新的15 mL离心管中,向DNA柱膜的正中加入0.5 mL的Endofree Elution Buffer,室温放置1分钟,> 2,500 x g 离心5分钟,以洗脱质粒DNA。若想提高得率,可用洗脱得到的0.5 mL的Endofree Elution Buffer再洗脱一次,收集到新的离心管中。
无内**质粒中量提取试剂盒操作流程:
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