无内**快速质粒中量提取试剂盒 PD1420-01 上海俊晟生物科技有限公司

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产品名称：无内**快速质粒中量提取试剂盒
产品型号：PD1420-01
产品展商：Biomiga

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发布时间：2018-07-26
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简单介绍

无内**快速质粒中量提取试剂盒EndoFree plasmid ezFlow midi kit处理15-50mL的菌液，可获得100-200µg的质粒DNA。

产品描述

无内**快速质粒中量提取试剂盒EndoFree plasmid ezFlow midi kit处理15-50mL的菌液，可获得100-200µg的质粒DNA。

无内**快速质粒中量提取试剂盒组分：

Catalog #	PD1420-00	PD1420-01	PD1420-02
Preps	2	10	25
EzBind^TM Columns	2	10	25
Buffer A1	6 mL	30 mL	70mL
Buffer B1	6 mL	30 mL	70 mL
Buffer N3	3 mL	15 mL	30 mL
Buffer KB	12 mL	60 mL	135 mL
Buffer RET	12 mL	60 mL	135 mL
Endofree Elution Buffer	3 mL	15 mL	40 mL
RNase A (20 mg/mL)	0.6 mg (30µL)	3 mg (150µL)	7 mg (350µL)
User Manual	1	1	1

保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。

注意事项：
1、质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer。
2、转化菌: 若为-70^oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存的菌进行培养。

无内**快速质粒中量提取试剂盒操作简明步骤：
1、取50 µL新鲜的菌液接种到15-50 mL （勿超过 50 mL）的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入2.5 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。

3、加入2.5 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。

4、加入1 mL Buffer N3，立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。

5、将裂解液转移至高速离心管，室温下在12,000 x g 离心10分钟。

6、转移上清液5 mL，向裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET),及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混匀，需马上离心过DNA柱。

7、立即转移6 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下5,000 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复此步直至所有的溶液通过DNA柱。

8、可选：向离心柱中加入5mL Buffer KB，室温下5,000xg 离心1min，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。

9、向离心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室温下5,000 x g 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。

10、将离心柱放回高速离心机中，室温下5,000 x g开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。

11、将离心柱转至一个新的15 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL的Endofree Elution Buffer, 室温放置1分钟，5,000 x g 离心5分钟，以洗脱质粒DNA。

12、将15 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟，5,000 x g 离心5分钟。两次洗脱将提高得率。

操作流程：