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- 产品名称：无内**快速质粒超大量提取试剂盒Mega10
- 产品型号：PD1624-01
- 产品展商：Biomiga
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- 发布时间：2012-11-20
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简单介绍
无内**快速质粒超大量提取试剂盒Mega10（EndoFree Plasmid ezFlow ezFilter Mega10 Kit）处理1000-2000mL的菌液，可获得10mg的质粒DNA。
产品描述
无内**快速质粒超大量提取试剂盒Mega10（EndoFree Plasmid ezFlow ezFilter Mega10 Kit）处理1000-2000mL的菌液，可获得10mg的质粒DNA。
无内**快速质粒超大量提取试剂盒Mega10组分：
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Catalog #
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PD1624-01
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Preps
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2
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DNA Unit
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2
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Filter Unit
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2
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Replacement Cup
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4
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Buffer A1
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220 mL
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Buffer B1
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220 mL
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Buffer N3
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70 mL
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Buffer KB
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110 mL
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Buffer RET
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440 mL
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RNase A (20 mg/mL)
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22 mg(1.1 mL)
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Endofree Elution Buffer
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60 mL
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User Manual
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1
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保存条件：
RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它组分室温保存。
注意事项：
1、质粒拷贝数：纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同体积的Wash Buffer (70% 乙醇)和Endofree Elution Buffer。
2、转化菌: 若为-70℃甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3、切勿直接取冻存在4℃的菌进行培养。
4、杯结合能力：10 mg
无内**快速质粒超大量提取试剂盒Mega10操作简明步骤：
1、取500 µL新鲜的菌液接种到 1,200-1,500 mL (勿超过 500 mL)的LB培养基（含适量***），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2、加入100 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保**沉淀重新悬浮。
3、加入 100 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4、加入30 ml Buffer N3, 立即反转几次至出现絮状白色沉淀。涡漩震荡10 秒。充分混匀后，溶液将会变的 颜色均一，如果此时溶液颜色不均一，均局部颜色过深，建议将溶液轻甩几次，以充分混合溶液，
5、将双层Filter unit与500 mL或1000 mL的**瓶(Corning# 430518 or 430282 or equivalent) 连接，旋紧，再将此装置与真空负压装置连接。
6、先将步骤“5”中底部较澄清的裂解产物转移至双层Filter unit中，静置5分钟后打开真空装置，使负压由低到高，5分钟后增至*大（0.04 Mpa）
7、当大部分裂解液已被过滤时，关掉真空负压装置，等候1分种，拆卸装置，移去双层Filter unit。
8、再将DNA unit杯与一个新的**的500 mL或1000 mL的**螺口标准瓶连接，旋紧。并将过滤嘴与真空负压装置连接。在步骤“7”中收集到的裂解液中加入1倍体积的Buffer RET (如220 mLBuffer RET加入220 mL的上清液中), 120 mL100%乙醇，立即混合均匀，立即将一半倒入DNA unit杯中，开启负压装置，进行过滤吸附操作。
9、再将剩下一半倒入DNA unit杯中，当所有裂解液已过滤完，再维持真空1分钟后，关掉负压装置。
10、向DNA Unit杯中加入50 mL Buffer KB，*大负压（0.04Mpa）1分钟，使液体完全通过DNA Unit 杯。
11、在DNA Unit杯中加入50 mL 70%乙醇，*大负压（0.04Mpa）1分钟，使乙醇完全通过DNA Unit杯。重复此操作步骤一次。
12、在DNA Unit杯中加入80 mL无水乙醇，*大负压1分钟，关掉负压装置，倒掉瓶子中的废液，将DNA Unit杯重新连接至标准瓶上，开启负压装置至*大负压，真空抽20分钟，以充分去除残留的乙醇。
13、关掉负压装置，静置一分钟，移去标准瓶，将DNA Unit 连接至一个新的50 mL的离心管中，并旋紧。
14、加入20 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上，室温放置2分钟，打开负压装置至*大（0.04 Mpa）洗脱DNA。此时会收集到10~12 mＬ洗脱液，这是1st 洗脱液。
15、关掉负压装置，将DNA Unit连接至一个新的50 mL的离心管中，加入5 mL Endofree Elution Buffer 到DNA Unit杯的膜上，室温静置2分钟，开启负压装置至*大（0.04 Mpa）洗脱DNA。此时会收集到约2~4 mL洗脱液，这是2nd洗脱液。
无内**质粒超大量提取试剂盒Mega10操作流程：
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